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志賀氏菌套裝生化鑒定管13種(GB 4789.5-2012)

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志賀氏菌套裝生化鑒定管13種(GB 4789.5-2012)
規(guī)格:20支/盒
用途:用于阪崎腸桿菌生化鑒定

志賀氏菌套裝生化鑒定管13種(GB 4789.5-2012)

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過氧化氫酶的測定
過氧化氫酶又稱接觸酶,能催化過氧化氫分解水和氧。
1.試劑:3-10%過氧化氫(H2O2)
2.菌種培養(yǎng):將測試菌種接種于合適的培養(yǎng)基斜面上,適溫培養(yǎng)18-24h。
3.試驗(yàn)方法:取一干凈的載波片,在上面滴1滴3-10%的H2O2,挑取1環(huán)培養(yǎng)18-24h的菌苔,在H2O2溶液中涂抹,若有氣泡(氧氣)出現(xiàn),則為過氧化氫酶陽性,無氣泡者為陰性。也可將*直接加入斜面上,觀察氣泡的產(chǎn)生。
4.注意事項(xiàng):過氧化氫酶是1種以正鐵血紅素作為輔基的酶,所以測試菌所生長的培養(yǎng)基不可含有血紅素或紅血球。

4、甲基紅(Methyl Red)試驗(yàn) 
腸桿菌科各菌屬都能發(fā)酵葡萄糖,在分解葡萄糖過程中產(chǎn)生丙酮酸,進(jìn)一步分解中,由于糖代謝的途徑不同,可產(chǎn)生乳酸,琥珀酸、醋酸和甲酸等大量酸性產(chǎn)物,可使培養(yǎng)基PH值下降至pH4.5以下,使甲基紅指示劑變紅。
試驗(yàn)方法:挑取新的待試純培養(yǎng)物少許,接種于MR-VP生化鑒定管,于36通用培養(yǎng)基,培養(yǎng)于36±1°C或30°C(以30°C較好)3~5天,從第二天起,每日取培養(yǎng)液1ml,加甲基紅指示劑1~2滴,陽性呈鮮紅色,弱陽性呈淡紅色,陰性為黃色。迄至發(fā)現(xiàn)陽性或至第5天仍為陰性、即可判定結(jié)果。
甲基紅為酸性指示劑,pH范圍為4.4~6.0,其pK值為5.0。故在pH5.0以下,隨酸度而增強(qiáng)黃色,在pH5.0以上,則隨堿度而增強(qiáng)黃色,在pH5.0或上下接近時(shí),可能變色不夠明顯,此時(shí)應(yīng)延長培養(yǎng)時(shí)間,重復(fù)試驗(yàn)。
5、V-P試驗(yàn)
某些細(xì)菌在葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)基中能分解葡萄糖產(chǎn)生丙酮酸,丙酮酸縮合,脫羧成乙酰甲基甲醇,后者在強(qiáng)堿環(huán)境下,被空氣中氧氧化為二乙酰,二乙酰與蛋白胨中的胍基生成紅色化合物,稱V-P(+)反應(yīng)。
試驗(yàn)方法:
1)O’Meara氏法:將試驗(yàn)菌接種于通用培養(yǎng)基,于36±1°C培養(yǎng)48h,培養(yǎng)液1ml加O’Meara試劑(加有0.3%肌酸Creatine或肌酸酐Creatinine的40%氫氧化鈉水溶液)1ml,搖動(dòng)試管1~2min,靜置于室溫或36±1°C恒溫箱,若4h內(nèi)不呈現(xiàn)伊紅、即判定為陰性。亦有主張?jiān)?8~50°C水浴放置2h后判定結(jié)果者。
2)Barritt氏法:將試驗(yàn)菌接種于通用培養(yǎng)基,于36±1°C培養(yǎng)4天、培養(yǎng)液2.5m*加入5°Cα萘酚(2-na-phthol)純酒精溶液0.6ml,再加40%氫氧化鉀水溶液0.2ml,搖動(dòng)2~5min,陽性菌常立即呈現(xiàn)紅色,若無紅色出現(xiàn),靜置于室溫或36±1°C恒溫箱,如2h內(nèi)仍不顯現(xiàn)紅色、可判定為陰性。
3)快速法:將0.5%肌酸溶液2滴放于小試管中、挑取產(chǎn)酸反應(yīng)的三糖鐵瓊脂斜面培養(yǎng)物一接種環(huán),乳化接種于其中,加入5%α-萘酚3滴,40%氫氧化鈉水溶液2滴,振動(dòng)后放置5min,判定結(jié)果。不產(chǎn)酸的培養(yǎng)物不能使用。
本試驗(yàn)一般用于腸桿菌科各菌屬的鑒別。在用于芽胞桿菌和葡萄球菌等其它細(xì)菌時(shí),通用培養(yǎng)基中的磷酸鹽可阻礙乙酰甲基醇的產(chǎn)生,故應(yīng)省去或以氯化鈉代替。

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