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實驗材料
1.菌種
大腸桿菌(Escherichia coli),金黃色葡萄球(Staphyloccocus aureus Rosenbach),
銅綠假單胞菌(P.Aeruginosa),枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis Cohn),
產氣腸桿菌(Enterobacter aerogenes),普通變形桿菌(Proteus.vulgaris)。
2.培養基
固體油脂培養基,固體淀粉培養基,葡萄糖發酵培養基(5支,附德漢式小管),乳糖發酵培養基(5支,附德漢式小管),蛋白胨水培養基,葡萄糖蛋白胨水培養基。
3.溶液和試劑
革蘭氏染色用盧戈氏碘液,甲基紅指示劑,乙醚和吲哚試劑,無菌水。
4.儀器和其他用品
平板,試管,接種環,試管架,電子天平,稱量紙,玻璃棒,三角瓶,燒杯,藥匙,標簽紙,酒精燈,滴管。
四、實驗步驟
1.制備培養基
制備固體淀粉培養基,固體油脂培養基,葡萄糖發酵培養基,乳糖培養基(內裝有倒置的德漢氏小管),蛋白胨水培養基,葡萄糖蛋白胨水培養基,制備方法見附錄
2.淀粉水解試驗
1.將固體淀粉培養基熔化后冷卻至50℃左右,無菌操作制成平板。
2.用記號筆在平板底部劃成4部分。
3.將枯草芽孢桿菌、大腸桿菌、*和銅綠假單胞菌分別在不同的部分點種,在平板的反面分別在4部分寫上菌名。
4將平板倒置在37℃溫箱中培養48h。
5觀察各種細菌的生長情況,打開平板蓋子,滴入少量盧氏碘液于平板中,輕輕旋轉平板,使碘液均勻鋪滿整個平板。如菌苔周圍出現無色透明圈,說明淀粉已被水解,為陽性。透明圈的大小可初步判斷該菌水解淀粉能力的強弱,即產生胞外*活力的高低。
3油脂水解試驗
1將熔化的固體油脂培養基冷卻至50℃左右時,充分搖蕩,使油脂均勻分布,無菌操作倒入平板,待凝。
2用記號筆在平板底部劃成4部分,分別在4部分標上菌名。
3用無菌操作將枯草芽孢桿菌、大腸桿菌、*和銅綠假單胞菌分別劃接種于平板的相對應部分的中心。
4將平板倒置,37℃溫箱中培養48h。
5取出平板,觀察菌苔顏色。如出現紅色斑點,說明脂肪水解,為陽性反應。
4糖發酵試驗
1用記號筆在各試管外壁上分別標明發酵培養基的名稱和所接種的細菌菌名。
2取葡萄糖發酵培養基試管3支,分別接入大腸桿菌、普通變形桿菌,第三支不接種,作為對照。另取乳糖發酵培養基試管3支,同樣分別接入大腸桿菌、普通變形桿菌,第三支不接種,作為對照。在接種后,輕緩搖動試管,使均勻,防止倒置的小管進入氣泡。
3將接過種和作為對照的6支試管均置37℃中培養48h。
4觀察各試管顏色變化及徳漢氏小管中有無氣泡。
5吲哚試驗
1用接種針將大腸桿菌、產氣腸桿菌分別接入2支蛋白胨水培養基中,置37℃中培養48h。
2于培養48h后的蛋白胨水培養基內加入3~4滴乙醚,搖動數次,靜置1min,待乙醚上升后,沿試管壁徐徐加入2滴吲哚試劑。在乙醚和培養物之間產生紅色環狀物為陽性反應。
6甲基紅試驗
1用接種針將大腸桿菌、產氣腸桿菌分別接入2支葡萄糖蛋白胨水培養基中,置37℃中培養48h。
2培養48h后,將1支葡萄糖蛋白胨水培養基培養物內加入甲基紅試劑2滴,培養基變為紅色者為陽性,變為黃色者為陰性。
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