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THLE-3細胞人肝上皮細胞細胞培養方法
1、收到細胞,請查看瓶子是否有破裂,培養基是否漏出,是否渾濁,如有請盡快。
2、收到細胞,如包裝完好,請在顯微鏡下觀察細胞。,由于運輸過程中的問題,細胞培養瓶中的貼壁細胞有可能從瓶壁中脫落下來,顯微鏡下觀察會出現細胞懸浮的情況,出現此狀態時,請不要打開細胞培養瓶,應立即將培養瓶置于細胞培養箱里靜止3-5小時左右,讓細胞先穩定下,再于顯微鏡下觀察,此時多數細胞會重新貼附于瓶壁。如細胞仍不能貼壁,請用臺盼藍染色法鑒定細胞活力,如臺盼藍染色證實細胞活力正常請按懸浮細胞的方法處理
3. 收到細胞時如無異常情況 ,請在顯微鏡下觀察細胞密度,如為貼壁細胞,未超過80%匯合度時,將培養瓶中培養基吸出,留下 5-10ML培養基繼續培養:超過80%匯合度時,請按細胞培養條件傳代培養。如為懸浮細胞,吸出培養液,1000轉/分鐘離心3分鐘,吸出上清,管底細胞用新鮮培養基懸浮細胞后移回培養瓶。
4,將培養瓶置于37℃培養箱中培養,蓋子微微擰松。吸出的培養基可以保存在滅菌過的瓶子里,存放于4℃冰箱,以備不時之需。
5 、24小時后,細胞形態已恢復并貼滿瓶壁,就可以傳代了。(貼壁細胞)將培養瓶里的培養基倒去,加3-5ml(以能覆蓋細胞生長面為準)PBS或Hanks’液洗滌后棄去。加0.5-1ml 0.25%含EDTA的胰酶消化,消化時間以具體細胞為準,一般1-3分鐘,不超過5分鐘。可以放入37℃培養箱消化。輕輕晃動瓶壁,見細胞脫落下來,加入3-5ml培養基終止消化。用移液管輕輕吹打瓶壁上的細胞,使之*脫落,然后將溶液吸入離心管內離心,1000rpm/5min。棄上清,視細胞數量決定分瓶數,一般一傳二,如細胞量多可一傳三,有些細胞不易傳得過稀,有些生長較快的細胞則可以多傳幾瓶,以具體細胞和經驗為準。(懸浮細胞)用移液管輕輕吹打瓶壁,直接將溶液吸入離心管離心即可。
6,貼壁細胞 ,懸浮細胞。嚴格無菌操作。換液時,換新的細胞培養瓶和換新鮮的培養液,37度 5%CO2 培養
7. 收到細胞后,請鏡下觀察細胞,用恰當方式處理細胞。若懸浮的細胞較多,請離心收集細胞,接種到一個新的培養瓶中。棄掉原液,使用新鮮配制的培養基,使用進口胎牛血清. 剛接到細胞,若細胞不多時 血清濃度可以加到15%去培養。若細胞迏到80%左右 ,血清濃度還是在10%。
培養基參考
500ml基礎培養基(含:必需與非必需氨基酸、維他命、有機與無機成分、激素、生長因子與微量元素)、細胞生長添加劑、抗生素/抗菌素溶液或青霉素/鏈霉素(P/S)溶液、FBS,適合在飽和濕度為5%CO2與95%空氣的培養箱中使用
產氣莢膜梭菌ATCC13124
熒光假單胞菌ATCC13525
嬰兒雙歧桿菌ATCC15697
短雙歧桿菌ATCC15700
青春雙歧桿菌ATCC15703
黑曲霉ATCC16404
惡臭假單胞菌ATCC17485
單增李斯特氏菌ATCC19111
溶組織梭菌ClostridiumhistolyticumATCC19401
生孢梭菌ATCC19404
破傷風桿菌/梭菌ClostridiumtetaniATCC19406
化膿性鏈球菌ATCC19615
黃桿菌屬ATCC21047
近平滑念珠菌ATCC22019
變異鏈球菌ATCC25175
脆弱擬桿菌ATCC25285
洋蔥假單胞菌ATCC25416
大腸埃希氏菌ATCC25922
金黃色葡萄球菌ATCC25923
宋內氏志賀氏菌(Sh.sonnei)ATCC25931
金黃色葡萄球菌ATCC27217
創傷弧菌ATCC27562
銅綠假單胞桿菌(綠膿桿菌)ATCC27853
糞腸球菌ATCC29212
金黃色葡萄球菌ATCC29213
兩歧雙歧桿菌ATCC29521
多形擬桿菌ATCC29741
糞腸球菌ATCC33186
空腸彎曲菌ATCC33291
金黃色葡萄球菌ATCC33591
大腸埃希氏菌ATCC35218
屎腸球菌ATCC35667
變異鏈球菌ATCC35668
遲緩真桿菌/遲緩埃格特菌ATCC43055
金黃色葡萄球菌ATCC43300
弗氏檸檬酸桿菌ATCC43864
淋病柰瑟氏菌ATCC49226
流感嗜血桿菌ATCC49247
肺炎鏈球菌ATCC49619
流感嗜血桿菌ATCC49766
糞腸球菌(高耐)ATCC51299
阪崎腸桿菌ATCC51329
克柔念珠菌ATCC6258
金黃色葡萄球菌ATCC6538
枯草芽孢桿菌ATCC6633
肺炎克雷伯菌ATCC700603
熱帶念珠菌ATCC750
嗜熱脂肪地芽孢桿菌ATCC7953
植物乳桿菌ATCC8014
大腸埃希氏菌ATCC8739
白色假絲酵母/白色念球菌ATCC90029
銅綠假單胞桿菌(綠膿桿菌)ATCC9027
枯草芽孢桿菌黑色變種ATCC9372
艱難梭菌ClostridiumdifficileATCC9689
啤酒酵母ATCC9763
黑曲霉ATCC10582
磚紅鏈霉菌ATCC19776
白色葡萄球菌ATCC8799
皺褶青霉ATCC10128
黑曲霉ATCC10864
釀酒酵母ATCC26603
釀酒酵母ATCC26785
運動發酵單孢菌ATCC29191
假單胞桿菌ATCC31554
糞產堿桿菌ATCC31555
肝細胞系統
人肝竇內皮細胞 Human Hepatic Sinusoidal Endothelial Cells
人肝內膽管上皮細胞 Human Intrahepatic Biliary Epithelial Cells
人肝細胞 Human Hepatocytes
人肝細胞 Human Hepatocytes
人肝星形細胞 Human Hepatic Slate Cells
膽囊細胞系統
人膽囊成纖維細胞 Human Gallbladder Fibroblasts
脾細胞系統
人脾血管內皮細胞 Human Splenic Endothelial Cells
人脾成纖維細胞 Human Splenic Fibroblasts
心臟細胞系統
人心臟微血管內皮細胞 Human Cardiac Microvascular Endothelial Cells
人冠狀動脈內皮細胞 Human Coronary Artery Endothelial Cells
人主動脈內皮細胞 Human Aortic Endothelial Cells
人主動脈平滑肌細胞 Human Aortic Smooth Muscle Cells
人主動脈成纖維細胞 Human Aortic Fibroblasts
人心肌細胞 Human Cardiac Myocytes
人心肌細胞--成人 Human Cardiac Myocytes-adult
人心臟成纖維細胞 Human Cardiac Fibroblasts
人心臟成纖維細胞--成人心室 Human Cardiac Fibroblasts-adult ventrical
人心臟成纖維細胞--成人心房 Human Cardiac Fibroblasts-adult atrial
人心臟成纖維細胞--成人 Human Cardiac Fibroblasts-adult
人心臟成纖維細胞--胎兒心房 Human Cardiac Fibroblasts-fetal atrial
人心包成纖維細胞 Human Pericardial Fibroblasts
視覺細胞系統
人角膜上皮細胞 Human Corneal Epithelial Cells
人角膜細胞 Human Keratocytes
人視網膜內皮細胞 Human Retinal Endothelial Cells
人視網膜色素上皮細胞 Human Retinal Pigment Epithelial Cells
人晶狀體上皮細胞 Human Lens Epithelial Cells
人虹膜色素上皮細胞 Human Iris Pigment Epithelial Cells
人結膜成纖維細胞 Human Conjunctival Fibroblasts
人無色素睫裝上皮細胞 Human Non-Pigment Ciliary Epithelial Cells
人小梁網細胞 Human Trabecular Meshwork Cells
人眼脈絡膜成纖維細胞 Human Ocular Choroid Fibroblasts
人結膜上皮細胞 Human Conjunctival Epithelial Cells
胎盤細胞系統
人絨毛膜毛細血管內皮細胞 Human Villus Capillary Endothelial Cells
人羊膜上皮細胞 Human Amniotic Epithelial Cells
人絨毛膜滋養層細胞 Human Villous Trophoblasts
人絨毛間充質成纖維細胞 Human Villous Mesenchymal Fibroblasts
脂肪細胞系統
人脂肪微血管內皮細胞 Human Adipose Microvascular Endothelial Cells
人前脂肪細胞--內臟 Human Preadipocytes-visceral
人前脂肪細胞--皮下 Human Preadipocytes-subcutaneous
女性生殖細胞系統
人卵巢微血管內皮細胞 Human Ovarian Microvascular Endothelial Cells
人卵巢表層上皮細胞 Human Ovarian Surface Epithelial Cells
人卵巢成纖維細胞 Human Ovarian Fibroblasts
人乳腺微血管內皮細胞 Human Mammary Microvascular Endothelial Cells
人乳腺上皮細胞 Human Mammary Epithelial Cells
人乳腺成纖維細胞 Human Mammary Fibroblasts
間充質干細胞系統
人羊膜間充質基質細胞 Human Amniotic Mesenchymal Stromal Cells
人絨毛膜間充質基質細胞 Human Chorionic Mesenchymal Stromal Cells
人間充質干細胞--骨髓 Human Mesenchymal Stem Cells-bone marrow
人間充質干細胞--脂肪 Human Mesenchymal Stem Cells-adipose
人間充質干細胞--肝臟 Human Mesenchymal Stem Cells-hepatic
人臍帶間充質干細胞 Human Umbilical Mesenchymal Stem Cells
人肺間充質干細胞 Human Pulmonary Mesenchymal Stem Cells
人脊椎間充質干細胞 Human Vertebral Mesenchymal Stem Cells
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