葡萄糖氧化酶（glucose oxidase，GOD）試劑盒說明書 
分光光度法  50 管/48 樣 
正式測定前務必取2-3個預期差異較大的樣本做預測定 
測定意義 
GOD （EC 1.1.3.4）廣泛存在于動物、 和植物中， 催化葡萄糖氧化生成葡萄糖酸，并產生H2O2，
是生物體中產生活性氧的代謝途徑之一。 
測定原理 
GOD催化產生H2O2，過氧化物酶在有氧存在時催化H2O2分解產生的氧又將鄰聯茴香胺氧
化生成有色物質，顏色深淺與葡萄糖氧化酶活性成線性關系。 
試驗中所需的儀器和設備 
可見分光光度計、水浴鍋、臺式離心機、可調式移液器、1 mL玻璃比色皿、研缽、冰、蒸
餾水 
試劑的組成和配制 
提取液：液體60mL×1 瓶，4℃保存； 
試劑一：液體 40 mL×1 瓶，4℃保存； 
試劑二：液體 8 mL×1 瓶，4℃保存； 
試劑三：液體 2 mL×1 支，4℃保存； 
樣品測定的準備   
組織處理：按照組織質量（g） ：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱取約0.1g組織，
加入 1mL提取液），進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。 
血清（漿）：直接檢測。 
測定步驟 
1、 分光光度計預熱 30min以上，調節波長至 500nm，蒸餾水調零。 
2、 GOD 檢測工作液的配制：用時將試劑二和試劑三轉移至試劑一中，充分混勻，待用；
用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復凍融。 
3、測定前將GOD 檢測工作液在37℃（哺乳動物）或25℃（其它物種）水浴 10min以上。 
4、在 1mL玻璃比色皿中加入 40μL樣本和 960μL工作液，立即混勻并計時，記錄 500nm下
20s吸光值 A1和 1min20s后的吸光值 A2。計算 ΔA＝A2-A1。 
GOD活力單位的計算 
1、血清（漿）GOD 活力的計算 
單位定義：每 mL血清（漿）每分鐘催化產生 1nmol 氧化型鄰聯茴香胺為一個酶活力單位。  
GOD（nmol/min/mL）=[ΔA×V反總÷（ε×d）×109
]÷V樣÷T=3333×ΔA 
2、動物組織GOD 活力的計算 
（1）按蛋白濃度計算 
單位定義：每 mg組織蛋白每分鐘催化產生1nmol 氧化型鄰聯茴香胺為一個酶活力單位。 
GOD（nmol/min/mg prot）=[ΔA×V反總÷（ε×d）×109
]÷(V樣×Cpr)÷T=3333×ΔA÷Cpr 
（2）按樣本鮮重計算 
葡萄糖氧化酶（glucose oxidase，GOD）試劑盒單位定義：每 g組織每分鐘催化產生 1nmol 氧化型鄰聯茴香胺為一個酶活力單位。 
GOD（nmol/min/ g 鮮重）=[ΔA×V反總÷（ε×d）×109
]÷（W ×V樣÷V樣總）÷T=3333×ΔA÷W 
V反總：反應體系總體積， 1×10-3
 L； ε： 氧化型鄰聯茴香胺摩爾消光系數， 7.5×103
 L / mol /cm；
d：比色皿光徑，1cm；V樣：加入樣本體積，0.04 mL；V樣總：加入提取液體積，1 mL；
T：反應時間，1 min；  Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL；W：樣本質量，g。 

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