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SDS-PAGE 凝膠配制試劑盒說明書

時間:2016-6-28閱讀:252
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For Research Use Only

 

僅供研究用

  EnoGene™ SDS-PAGE 凝膠配制試劑盒

 

EnoGene™ SDS-PAGE Gel Preparation Kit

 

 

LOT:QY-AB1140

 

SDS-PAGE 凝膠配制試劑盒

一、產品介紹

 

SDS-PAGE 凝膠配制試劑盒提供了配制 SDS-PAGE 凝膠所需的各種試劑,用戶只需自備制膠器具和蒸餾水,即可配制

 

PAGE 膠了。SDS-PAGE 凝膠配制試劑盒不僅可用于配制 SDS-PAGE 凝膠,也可用于配制非變性(native)PAGE 凝膠。本試劑盒約可配制 10-50 塊常規大小的 PAGE 膠(即聚丙烯酰胺凝膠)

二、試劑盒組份

 

E1WP302

儲存

 

 

 

30% Acr-Bis291

100 mL

4

 

 

 

1M Tris-HCl, pH8.8

100 mL

4

 

 

 

1M Tris-HCl, pH6.8

25 mL

4

 

 

 

10% SDS

5mL

4

 

 

 

Ammonium Persulfate(過硫酸銨)

1g

4

 

 

 

TEMED

0.5mL

4

 

 

 

 

 

三、試劑盒以外自備儀器和試劑

 

可調移液器、垂直板電泳儀、雙蒸水

 

SDS-PAGE 凝膠配制試劑盒四、操作步驟

 

1 根據目的蛋白的分子量大小選擇合適的凝膠濃度,再按照下面的表格配制SDS-PAGE的分離膠(即下層膠):不同濃度的SDS-PAGE分離膠的分離范圍:

 

SDS-PAGE 分離膠濃度

分離范圍

 

 

6%

50-150kD

 

 

8%

30-90kD

 

 

10%

20-80kD

 

 

12%

12-60kD

 

 

15%

20kD 以下

 

 

 

2、按照下面的配方進行配制(總體積為15ml),如有體積變動可按比例進行放大或縮小。過硫酸銨配制成10%溶液后(0.5g中加入4.5ml蒸餾水溶解),分裝成小管-20℃保存,通常半年內有效。

注:如果配制非變性膠,參考上述配方,不加10%SDS即可配制成非變性PAGE膠。

 

貯液(ml

分離膠中丙烯酰胺的終濃度(%

 

 

 

 

 

 

 

6

8

10

12

15

 

 

 

 

 

 

蒸餾水

6.0

5.0

4.0

3.0

1.5

 

 

 

 

 

 

30% Acr-Bis291

3.0

4.0

5.0

6.0

7.5

 

 

 

 

 

 

1M Tris-HCl, pH8.8

5.7

5.7

5.7

5.7

5.7

 

 

 

 

 

 

10% SDS

0.15

0.15

0.15

0.15

0.15

 

 

 

 

 

 

10%的過硫酸銨

0.15

0.15

0.15

0.15

0.15

 

 

 

 

 

 

TEMED

0.01

0.01

0.01

0.01

0.01

 

 

 

 

 

 

 

For Research Use Only

 

僅供研究用

 

 

3 按照如下表格配制SDS-PAGE的濃縮膠(也稱堆積膠、積層膠或上層膠)

 

成分

配制不同體積 SDS-PAGE 濃縮膠所需各成分的體積(毫升)

 

 

 

 

 

 

 

5%

2

3

4

6

8

10

 

 

 

 

 

 

 

蒸餾水

1.4

2.1

2.7

4.1

5.5

6.8

 

 

 

 

 

 

 

30% Acr-Bis291

0.33

0.5

0.67

1.0

1.3

1.7

 

 

 

 

 

 

 

1M Tris-HCl, pH6.8

0.25

0.38

0.5

0.75

1.0

1.25

 

 

 

 

 

 

 

10% SDS

0.02

0.03

0.04

0.06

0.08

0.1

 

 

 

 

 

 

 

10%的過硫酸銨

0.02

0.03

0.04

0.06

0.08

0.1

 

 

 

 

 

 

 

TEMED

0.002

0.003

0.004

0.006

0.008

0.01

 

 

 

 

 

 

 

 

五、注意事項:

 

1、所過硫酸銨配制成10%溶液后,應當-20℃保存。同時應盡量減少室溫存放時間,以防失效。

 

2 TEMED宜避光保存。另外凝膠凝聚的速度和溫度及光照關系密切,可通過適當調節TEMED的用量,控制在不同的室

 

內環境下凝膠凝聚的速度。

 

3、請穿實驗服并戴一次性手套操作。

 

4

 

六、保存條件:

 

1M Tris-HCl, pH8.810% SDSAmmonnium persulfate (過硫酸銨) 粉末和1M Tris-HCl, pH6.8室溫或4℃保存。30% Acr-Bis (29:1)TEMED 4℃避光保存。

 

過硫酸銨配制成10%溶液后(0.5g中加入4.5ml蒸餾水溶解,1g9ml蒸餾水溶解),分裝成小管-20℃保存,通常半年內有效。

 

 

 

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