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僅供研究用
EnoGene™ SDS-PAGE 凝膠配制試劑盒
(EnoGene™ SDS-PAGE Gel Preparation Kit)
LOT:QY-AB1140
SDS-PAGE 凝膠配制試劑盒
一、產品介紹
SDS-PAGE 凝膠配制試劑盒提供了配制 SDS-PAGE 凝膠所需的各種試劑,用戶只需自備制膠器具和蒸餾水,即可配制
PAGE 膠了。SDS-PAGE 凝膠配制試劑盒不僅可用于配制 SDS-PAGE 凝膠,也可用于配制非變性(native)PAGE 凝膠。本試劑盒約可配制 10-50 塊常規大小的 PAGE 膠(即聚丙烯酰胺凝膠)。
二、試劑盒組份
組 | 份 | E1WP302 | 儲存 |
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30% Acr-Bis(29:1) | 100 mL | 4℃ | |
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1M Tris-HCl, pH8.8 | 100 mL | 4℃ | |
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1M Tris-HCl, pH6.8 | 25 mL | 4℃ | |
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10% SDS | 5mL | 4℃ | |
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Ammonium Persulfate(過硫酸銨) | 1g | 4℃ | |
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TEMED | 0.5mL | 4℃ | |
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三、試劑盒以外自備儀器和試劑
可調移液器、垂直板電泳儀、雙蒸水
SDS-PAGE 凝膠配制試劑盒四、操作步驟
1、 根據目的蛋白的分子量大小選擇合適的凝膠濃度,再按照下面的表格配制SDS-PAGE的分離膠(即下層膠):不同濃度的SDS-PAGE分離膠的分離范圍:
SDS-PAGE 分離膠濃度 | 分離范圍 |
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6%膠 | 50-150kD |
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8%膠 | 30-90kD |
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10%膠 | 20-80kD |
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12%膠 | 12-60kD |
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15%膠 | 20kD 以下 |
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2、按照下面的配方進行配制(總體積為15ml),如有體積變動可按比例進行放大或縮小。過硫酸銨配制成10%溶液后(0.5g中加入4.5ml蒸餾水溶解),分裝成小管-20℃保存,通常半年內有效。
注:如果配制非變性膠,參考上述配方,不加10%SDS即可配制成非變性PAGE膠。
貯液(ml) | 分離膠中丙烯酰胺的終濃度(%) | ||||
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| 6 | 8 | 10 | 12 | 15 |
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蒸餾水 | 6.0 | 5.0 | 4.0 | 3.0 | 1.5 |
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30% Acr-Bis(29:1) | 3.0 | 4.0 | 5.0 | 6.0 | 7.5 |
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1M Tris-HCl, pH8.8 | 5.7 | 5.7 | 5.7 | 5.7 | 5.7 |
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10% SDS | 0.15 | 0.15 | 0.15 | 0.15 | 0.15 |
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10%的過硫酸銨 | 0.15 | 0.15 | 0.15 | 0.15 | 0.15 |
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TEMED | 0.01 | 0.01 | 0.01 | 0.01 | 0.01 |
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For Research Use Only
僅供研究用
3、 按照如下表格配制SDS-PAGE的濃縮膠(也稱堆積膠、積層膠或上層膠):
成分 | 配制不同體積 SDS-PAGE 濃縮膠所需各成分的體積(毫升) | |||||
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5%膠 | 2 | 3 | 4 | 6 | 8 | 10 |
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蒸餾水 | 1.4 | 2.1 | 2.7 | 4.1 | 5.5 | 6.8 |
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30% Acr-Bis(29:1) | 0.33 | 0.5 | 0.67 | 1.0 | 1.3 | 1.7 |
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1M Tris-HCl, pH6.8 | 0.25 | 0.38 | 0.5 | 0.75 | 1.0 | 1.25 |
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10% SDS | 0.02 | 0.03 | 0.04 | 0.06 | 0.08 | 0.1 |
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10%的過硫酸銨 | 0.02 | 0.03 | 0.04 | 0.06 | 0.08 | 0.1 |
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TEMED | 0.002 | 0.003 | 0.004 | 0.006 | 0.008 | 0.01 |
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五、注意事項:
1、所過硫酸銨配制成10%溶液后,應當-20℃保存。同時應盡量減少室溫存放時間,以防失效。
2、 TEMED宜避光保存。另外凝膠凝聚的速度和溫度及光照關系密切,可通過適當調節TEMED的用量,控制在不同的室
內環境下凝膠凝聚的速度。
3、請穿實驗服并戴一次性手套操作。
4、
六、保存條件:
1M Tris-HCl, pH8.8、10% SDS、Ammonnium persulfate (過硫酸銨) 粉末和1M Tris-HCl, pH6.8室溫或4℃保存。30% Acr-Bis (29:1)和TEMED 4℃避光保存。
過硫酸銨配制成10%溶液后(0.5g中加入4.5ml蒸餾水溶解,1g中9ml蒸餾水溶解),分裝成小管-20℃保存,通常半年內有效。
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