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谷氨酸(glutamic acid,Glu)含量試劑盒

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谷氨酸(glutamic acid,Glu)含量測定試劑盒說明書分光光度法 50 管/48 樣 
正式測定前務必取2-3個預期差異較大的樣本做預測定 
測定意義: 
Gu廣泛存在于動物、植物、微生物和培養細胞中,不僅是組成蛋白質的20 種氨基酸之一,
而且通過轉氨基作用參與多種氨基酸合成,是生物體內主要氨基來源之一。此外,Glu還是
味精的主要有效成分,常用做食品添加劑以及香料生產。 
測定原理: 
利用提取液提取,然后用顯色劑進行顯色,顯色后在 570nm 下進行測定。 
谷氨酸(glutamic acid,Glu)含量測定試劑盒需自備的儀器和用品: 
可見分光光度計、臺式離心機、可調式移液器、1 mL 玻璃比色皿、研缽、冰、蒸餾水。 
試劑的組成和配制: 
試劑一:液體100mL×1 瓶,4℃保存; 
試劑二:粉劑×1 瓶,  4℃保存;臨用前加入 10mL 蒸餾水,充分混勻溶解,用不完的試劑
仍  4℃保存。 
谷氨酸提取:  
1、細菌或培養細胞樣品:先收集細菌或細胞到離心管內,離心后棄上清;按照細菌或細胞
數量(104
個):試劑一體積(mL)為 500~1000:1 的比例(建議 1000 萬細菌或細胞加入
2mL 試劑一) ,超聲波破碎細菌或細胞(冰浴,功率 20%或 200W,超聲 3s,間隔 10s,重
復 30 次);8000g 常溫離心 10min,取上清,置冰上待測。 
2、組織樣品:按照組織質量(g) :試劑一體積(mL)為 1:5~10 的比例(建議稱取約 0.2g組
織,加入 2mL試劑一),進行冰浴勻漿。8000g 常溫離心 10min,取上清,置冰上待測。 
3、血清(漿)或細胞培養液樣品:按照血清(漿)或細胞培養液體積(mL) :試劑一體積
(mL)為 1:5~10 的比例(建議取 0.2mL 血清(漿)或者細胞培養液加入 2mL 試劑一) ,進
行冰浴勻漿。8000g 常溫離心10min,取上清,置冰上待測。 
 
谷氨酸(glutamic acid,Glu)含量測定試劑盒測定步驟 
1、 分光光度計預熱 30min以上,調節波長至 570nm,蒸餾水調零。 
2、 在有蓋 EP管中加入下列試劑: 
試劑名稱(μL)  測定管  對照管 
樣本  1000   
試劑一    1000 
試劑二  200  200 
混勻,90℃水浴20min(蓋緊,以防止水分散失) ,流水冷卻,于570nm波長處比色,△A=A
測定管-A 對照管。對照管只要做一管。 
注意事項: 
為提高檢測靈敏度,測定管的吸光值應小于 1,若大于1 則需要將上清液用試劑一稀釋至適
當倍數后測定,計算公式中乘以相應稀釋倍數。  
 
 
谷氨酸含量計算: 
1、標準條件下測定回歸方程為 y = 0.0328x- 2.423;  x為谷氨酸含量(µg/mL),y為吸光值。  
2、按照血清(漿)或者細胞培養液體積計算 
谷氨酸含量(μg/mL)= [(△A +2.423)÷0.0328×V1]÷(V3×V1÷V2)=304.9×(△A+2.423) 
3、按照蛋白濃度計算 
谷氨酸含量(µg/mg prot)=[(△A +2.423)÷0.0328×V1]÷(V1×Cpr)=30.49×(△A+2.423) ÷Cpr 
4、按照樣本質量計算 
谷氨酸含量(µg/g鮮重)=[(△A +2.423)÷0.0328×V1]÷(W ×V1÷V2)=61×(△A+2.423) ÷W 
5、按照細菌或細胞密度計算 
谷氨酸含量(μg/104
 cell)=[(△A +2.423)÷0.0328×V1]÷(1000×V1÷V2)=0.061×(△A+2.423) 
V1:加入反應體系中樣本體積,1mL;V2:加入提取液體積,2 mL;V3:加入血清(漿)
或細胞培養液體積,0.2 mL;  Cpr:樣本蛋白質濃度,mg/mL;W:樣本質量,g;1000:
細菌或細胞總數,1000萬。 
注意:該試劑盒僅適用于發酵液或組織中谷氨酸含量測定,檢測下限為70µg/mL。 

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