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肝素鈉效價方法詳細資料

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肝素鈉效價方法

2. 1 羊血漿的制備
取冷凍貯藏的綿羊血漿,置于不超過37 ℃的水浴融化,以脫脂棉過濾至清潔干燥的玻瓶中備用。
取血漿1 mL 置試管內,加入0. 25 %氯化鈣溶液0. 8mL ,混勻,在(37 ±1) ℃水浴中保溫,若在5 min 內凝結,則血漿可用于實驗。

2. 2 標準品溶液的制備
取肝素鈉標準品(204 u/ mL) 適量,用煮沸放冷的純化水稀釋至100 u/ mL ,置4 ℃冷藏備用。臨用前用生理鹽水稀釋至7 u/ mL 。

2. 3 供試品溶液的制備
稱取肝素鈉原料或量取肝素鈉注射液適量,按估計效價用生理鹽水稀釋至與標準溶液相當的效價濃度。

2. 4 血漿半凝固度劑量(V1/ 2) 的測定
取具塞試管3 支,分別于各試管中加入梯度劑量(170 ,200 ,230μL) 的標準溶液,再按順序準確加入血漿1. 0 mL ,0. 25 %氯化鈣溶液0. 8 mL ,立即加塞,倒置混合3 次,置(37 ±0. 5) ℃恒溫水浴中保溫,準
確記錄1 min ,判斷每管凝結程度,結果判定V1/ 2在200μL 左右。以此為中點,左右各以10μL 為一級,同法操作,測定V1/ 2為190μL 。
2. 5 肝素鈉及其制劑的效價測定
取具塞試管若干支,分別于各試管中加入梯度劑量的標準溶液和供試品溶液,以190μL 為中點,每隔10μL 為一級,同2. 3 項下方法操作,記錄每管凝結程度,按式(1) 計算。
供試品的效價單位= Vstd ×Cstd ×V
Vsam ×Wsam
(1)
式中:Vstd. 標準品1/ 2 凝固度的肝素加入體積(μL) ;Cstd. 標準品溶液的濃度(u/ mL) ; Vsam. 供試品1/ 2 凝固度時的加入體積(μL) ;Wsam. 供試品稱取的重量(mg) ; V. 測定樣
品的總體積(mL)

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