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上海逸研生物科技有限公司


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小鼠*Ⅷ(FⅧ)ELISA Kit

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產(chǎn)品型號

品       牌

廠商性質代理商

所  在  地上海市

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更新時間:2017-09-15 14:49:20瀏覽次數(shù):211次

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經(jīng)營模式:代理商

商鋪產(chǎn)品:1246條

所在地區(qū):上海上海市

聯(lián)系人:何經(jīng)理 (經(jīng)理)

產(chǎn)品簡介

小鼠*Ⅷ(FⅧ)ELISA Kit
英文名稱:Mouse coagulation factor Ⅷ(FⅧ) ELISA Kit
別名: RP11-115M6.7, AHF, DXS1253E, F8B, F8C, FVIII, HEMA, coagulation factor VIII|coagulation factor VIIIc|factor VIII F8B

詳細介紹

其他種屬:Dog Human Pig

待測物名稱:coagulation factor VIII, procoagulant component

蛋白功能1:Immunity

蛋白功能3:Acute phase

檢測范圍:0.312 ng/ml-20 ng/ml

靈敏度:0.078 ng/ml

小鼠*Ⅷ(FⅧ)ELISA Kit

 

【預期應用】ELISA 法定量測定血清、血漿、細胞培養(yǎng)物上清、組織裂解液中*Ⅷ(FⅧ) 含量。

【產(chǎn)品性能指標】

1、檢測范圍:15.6 pg/ml-1000 pg/ml

2、靈敏度:3.9 pg/ml

3、精密度:批內(nèi)差CV%<8%,批間差CV%<10%

小鼠*Ⅷ(FⅧ)ELISA Kit【實驗原理】

用純化的抗體包被微孔板,制成固相載體,往包被抗*Ⅷ(FⅧ) 抗體的微孔中依次加入標本或標準品、

*化的抗*Ⅷ(FⅧ) 抗體、HRP 標記的親和素,經(jīng)過*洗滌后用底物TMB 顯色。TMB 在過

氧化物酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣本中的*Ⅷ(FⅧ)

呈正相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度(OD 值),計算樣本濃度。

【試劑盒組成成分】

組份48T/96T

酶標板 (Assay plate) 12 ×8

標準品 (Standard) 2 (凍干品)

*標記抗體 (Biotin-antibody) 1 x 120 μl/(100×)

辣根過氧化物酶標記親和素 (HRP-avidin) 1 x 120 μl/(100×)

*標記抗體稀釋液 (Biotin-antibody Diluent) 1 x 15 ml/

辣根過氧化物酶標記親和素稀釋液 (HRP-avidin Diluent) 1 x 15 ml/

* (Sample Diluent) 1 x 50 ml/

濃洗滌液 (Wash Buffer) 1 x 20 ml/(25×)

底物溶液 (TMB Substrate) 1 x 10 ml/

終止液 (Stop Solution) 1 x 10 ml/

板貼4

【所需試劑和器材】

標準規(guī)格酶標儀;高速離心機;電熱恒溫培養(yǎng)箱;干凈的試管和離心管;容量瓶;

系列可調(diào)節(jié)移液器及吸頭;多通道移液器;蒸餾水等

【樣本采集及保存】

1、血清:全血標本請于室溫放置2 小時或4°C 過夜后于2 - 8°C 1000 x g 離心15 分鐘,取

上清即可立即檢測;或進行分裝,并將標本放于-20°C -80°C 保存,但應避免反復凍融。

解凍后的樣品應再次離心,然后檢測。

2、血漿:可用EDTA 或肝素作為抗凝劑,標本采集后30 分鐘內(nèi)于2 - 8°C 1000 g 離心15

分鐘,取上清即可立即檢測;或進行分裝,并將標本放于-20℃或-80℃保存,但應避免反

復凍融。解凍后的樣本應再次離心,然后檢測。

3、細胞培養(yǎng)物上清:標本于2 - 8°C 1000 x g 離心15 分鐘取上清,上清立即用于實驗,或

分裝后于-20°C -80°C 保存。避免反復凍融。

4、組織裂解液:取100mg 組織,用1X PBS 洗去血污。剪成小塊放入組織研磨器(勻漿管)中,加入1 ml 1X PBS,制成勻漿,然后置于-20°C 過夜。經(jīng)過反復凍融2 次處理破壞細

胞膜后,將組織勻漿于2 - 8°C 5000 g 離心5 分鐘取上清。取適量上清液立即進行實驗,

或將上清分裝保存于-20°C -80°C 。解凍后的樣本應再次離心,然后檢測。避免反復凍

融。

注:標本溶血會影響zui后檢測結果,因此溶血標本不宜進行此項檢測。

【試劑配制】

1、 標準品

(1) 從試劑盒中取出一支標準品,于6000-10000rpm 離心30 秒。用1ml *溶解,并

用槍頭對準凍存管底部反復吸打5 次以助溶解,充分混勻得到標準品S7,放置備用。

(2) 7 1.5 ml 離心管(S0-S6)依次排列,各加入250μl *。吸取250μl 標準品

S7 到*個離心管中(S6),輕輕吹打混勻。從S6 中吸取250μl 到第二個EP 管中(S5)

輕輕吹打混勻。以此類推進行標準品的倍比稀釋。S0 為*。

2、 洗液工作液

濃洗滌液按1:25倍用去離子水進行稀釋。例如用量筒量取240ml去離子水,倒入燒杯或其

他潔凈容器中,再量取10ml濃洗滌液,均勻加入,攪拌混勻,在臨用前配妥。濃洗滌液低溫保

存會有鹽析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶。

3、 *標記抗體工作液

*標記抗體液按1:100倍用*標記抗體稀釋液進行稀釋。如10μl*標記抗體加

990μl*標記抗體稀釋液,輕輕混勻,在臨用前10分鐘內(nèi)配妥。

4、 辣根過氧化物酶標記親和素工作液

辣根過氧化物酶標記親和素按1:100倍用辣根過氧化物酶標記親和素稀釋液進行稀釋。如

10μl辣根過氧化物酶標記親和素加990μl辣根過氧化物酶標記親和素稀釋液,輕輕混勻,在臨用

10分鐘內(nèi)配妥。

【重要提示】

1、實驗開始前,請?zhí)崆芭渲煤盟性噭T噭┗驑颖鞠♂寱r,均需混勻,混勻時盡量避免起

泡。

2、用戶在初次使用試劑盒時,應將各種試劑管離心數(shù)分鐘,以便管蓋和管壁上的液體集中到

管底。

3、在配制標準品、檢測溶液工作液時,請以相應的稀釋液配制,不能混淆。

4、 因實際裝量多于標示裝量,配制工作試劑請用精準的計量工具(移液槍或量筒等)量取,

切勿不經(jīng)量取直接使用。

5、標準品、*標記抗體工作液、辣根過氧化物酶標記親和素工作液稀釋前根據(jù)預先計算

好的每次實驗所需的總量配制,實際配制時應多配制0.1-0.4ml。請勿重復使用已稀釋過

的標準品、*標記抗體工作液、或辣根過氧化物酶標記親和素工作液。

6、標準品的稀釋請勿于板中進行,標準品應于臨用前15 分鐘內(nèi)配制。為保證實驗有效性,

建議每次實驗使用新的標準品。若保存得當,溶解后的標準品S7 可在2-8℃保存,7 天內(nèi)

使用有效。

 

 

【操作步驟】

1、將各種試劑移至室溫(18-25℃)平衡至少30 分鐘,按前述方法配制試劑,備用。

2、加樣:分別設標準品孔、待測樣本孔。每孔分別加標準品或待測樣本100μl,輕輕晃動混

勻,覆上板貼,37℃溫育2 小時。

3、棄去液體,甩干,不用洗滌。

4、每孔加*標記抗體工作液100μl,覆上新的板貼,37℃溫育1 小時。

5、棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板3 次。每次浸泡2 分鐘,200μl/每孔,甩干。

6、每孔加辣根過氧化物酶標記親和素工作液100μl,覆上新的板貼,37℃溫育1 小時。

7、棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板5 次。每次浸泡2 分鐘,200μl/每孔,甩干。

8、依序每孔加底物溶液90μl37℃避光顯色15-30 分鐘。

9、依序每孔加終止溶液50μl,終止反應。

10、在反應終止后5 分鐘內(nèi)用酶標儀在450nm 波長依序測量各孔的光密度(OD 值)。

【操作要點】

1、為保證檢測結果的準確性,建議標準品及樣本均設雙孔測定。每次檢測均需做標準曲線。

2、如標本中待測物質含量過高,請先用*進行稀釋,以使樣本符合試劑盒的檢測范

圍,zui后計算時再乘以相應的稀釋倍數(shù)。

3、 加樣:加樣時,請使用一次性的潔凈吸頭,避免交叉污染。加樣時應盡量輕緩,避免起泡,

將樣本加于酶標板孔底部,切勿沿孔壁加樣。一次加樣時間控制在10 分鐘內(nèi),如標

本數(shù)量多,*使用排槍加樣。

4、 溫育:為防止樣本蒸發(fā)或污染,溫育過程中酶標板必須覆上板貼,實驗過程中酶標板應避

免處于干燥的狀態(tài)。溫育過程中應隨時觀察溫箱溫度是否恒定于37℃,及時調(diào)整。溫育

過程中,溫箱不易開啟太多次,以免影響溫度平衡。

5、 洗滌:洗滌過程非常重要,不充分的洗滌易造成假陽性。

(1) 手工洗板方法:吸去(不可觸及孔壁和孔底)或甩掉酶標板內(nèi)的液體;在實驗臺上鋪

墊幾層吸水紙,酶標板朝下用力拍幾次;將*的洗滌緩沖液按200μl/孔注入孔內(nèi),

浸泡2 分鐘。根據(jù)操作步驟中所述,重復此過程數(shù)次。

(2) 自動洗板:如果有自動洗板機,應在熟練使用后再用到正式實驗過程中。

6、 顯色:為保證實驗結果的準確性,底物反應時間到后應盡快加入終止液。可在加入底物溶

液后每隔一段時間觀察一下顯色情況以控制反應時間(比如每隔10 分鐘)。當肉眼可見標

準品前3-4 孔有明顯梯度藍色,后3-4 孔顯色不明顯時,即可加入終止液終止反應,此時

藍色立刻變?yōu)辄S色。終止液的加入順序應盡量與底物溶液的加入順序相同。

7、底物溶液應為淺藍色或無色,如果顏色嚴重變深則必須棄用。底物溶液易受污染,請避光

妥善保存。

【數(shù)據(jù)處理】

可將標準品及樣本值減去S0 孔數(shù)值后繪制曲線,如果設置復孔,則應取其平均值計算。以標

準品的濃度為縱坐標(對數(shù)坐標),OD 值為橫坐標(對數(shù)坐標),在對數(shù)坐標紙上繪出標準曲

線。*使用專業(yè)制作曲線軟件進行分析,可從我們的下載專業(yè)軟件"Curve Expert 1.3"

并根據(jù)提示制作標準曲線。根據(jù)樣本OD 值,由標準曲線查出相應的濃度;或用標準品的濃度

OD 值計算出標準曲線的回歸方程式,將樣本的OD 值代入方程式,計算出樣本濃度。若樣

本檢測前進行過稀釋,zui后計算時需乘以相應的稀釋倍數(shù),即為樣本的實際濃度。

【說明】

1、本試劑盒僅供研究使用。

2、中、英文說明書可能會有不*之處,請以英文說明書為準。

3、本操作說明也適用于48T 試劑盒。48T 試劑盒中酶標板、標準品、*標記抗體及辣根

過氧化物酶標記親和素數(shù)量減半。

4、不同批號試劑不能混用。不要用其它生產(chǎn)廠家的試劑替換試劑盒中的試劑。

5、剛開啟的酶標板孔中可能會含有少許水樣物質,此為正常現(xiàn)象,不會對實驗結果造成任何

影響。

 

上海逸研生物科技有限公司專業(yè)從事于elisa試劑盒的銷售及elisa待測服務,代理國內(nèi)外的elisa試劑盒,并自主研發(fā)常規(guī)elisa試劑盒,質量*,*,歡迎廣大客戶和訂購,代理品牌:RD代理、eBioscinece代理、biovision代理、華美CUSABIO代理、優(yōu)爾生代理、博士德代理等。

 


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