大鼠磷酸化核因子κB抑制蛋白α(pIKBα)ELISA試劑盒實驗步驟 

一、預試驗

（一）抗體包被的酶標板的制備

1.  以碳酸鹽緩沖液將抗體稀釋成適當濃度（參考：5ug/ml），加入酶標板（50ul/孔），以膠帶封口，于4℃過液。

2.  棄抗體液，以雙蒸水沖洗3次，自然干燥后以膠帶封口。此為由已知抗體包被的酶標板，備用。

（二）底物濃度的摸索在底物緩沖液中加入不同量的底物（參考：5mg/10ml），加入酶標板中（50ul/孔），以膠帶封口，37℃避光保存2h，在沒有明顯變色的條件下選擇盡可能大的底物濃度。

（三）酶標抗原濃度的摸索選擇明確為陰性的標本，加至已包被抗體的酶標板中（50ul/ 孔）；用稀釋液稀釋酶標抗原至適當倍數（參考：40~4000倍），同時加入酶標板中（50ul/ 孔），混合后封口后于37℃作用30min。大鼠磷酸化核因子κB抑制蛋白α(pIKBα)ELISA試劑盒以洗液連續沖洗5次，然后于吸水紙上拍干，加入已摸索好的底物封口后于37℃作用30min，在保持有明顯變色的條件下選擇盡可能小的酶標抗原濃度。

二、正式試驗

1.  以稀釋液將待檢標本做適當稀釋（預試中確定）加入包被有已知抗原的酶標板中（50ul/孔），加封口膠帶于37℃作用30min。

2.  棄反應液，以沖洗液連續洗板5次并于吸水紙上拍干。

3.  加入酶標抗體（濃度在預試中確定）。加封口膠帶后于37℃作用30min。

4.  重復第2步。

5.  加底物（濃度在預試中確定），加封口膠帶后于室溫下避光作用5-60 min，其間不時觀察，顯色滿意后加終止液50ul/孔。

6.  于酶標儀測定OD值，OPD用492nm測定，TMB用450nm測定。窗體頂端

大鼠磷酸化核因子κB抑制蛋白α(pIKBα)ELISA試劑盒結果演示

大鼠磷酸化核因子κB抑制蛋白α(pIKBα)ELISA試劑盒結果判斷定性測定 

  定性測定的結果判斷是對受檢標本中是否含有待測抗原或抗體作出"有"或"無"的簡單回答，分別用"陽性"、"陰性"表示。"陽性"表示該標本在該測定系統中有反應。"陰性"則為無反應。用定性判斷法也可得到半定量結果，即用滴度來表示反應的強度，其實質仍是一個定性試驗。在這種半定量測定中，將標本作一系列稀釋后進行試驗，呈陽性反應的zui高稀釋度即為滴度。根據滴度的高低，可以判斷標本反應性的強弱，這比觀察不稀釋標本呈色的深淺判斷為強陽性、弱陽性更具定量意義。

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