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為什么神經干細胞要懸浮培養?
神經干細胞和其他干細胞一樣,在體內也是和周圍細胞及基質黏附在一起的,這樣看來,它應該是貼壁生長的。但為什么我們要懸浮培養呢?是為了抑制其分化?那為什么懸浮的時候它不容易分化,而貼壁反而容易分化呢?
另外,既然神經干細胞在體內黏附生長,那么在體外懸浮培養為什么不會死亡呢(其他的細胞基本都會死亡)?據我所知,能夠懸浮培養的細胞主要是(造)血細胞和神經干細胞,而血細胞在體內就是懸浮的,這可以理解,但神經干細胞在體內卻不是這樣的。
據此,我認為,神經干細胞在體外貼壁生長更符合其在體內的情況,能更好地抑制其分化。當然這需要我們找到一種更好的培養底物。
請結合 Gage FH: Mammalian neural stem cells. Science 2000,287:1433-1438.
Reynolds, B. A. & Rietze, R. L. Neural stem cells and neurospheres — re-evaluating the relationship. Nature Methods 2, 333–336 (2005)兩篇綜述。
*篇參考文文獻雖然是2000年的,但是大牛Gage對體外、體內移植和內源的神經干細胞研究都做了非常富有邏輯性的討論,告訴我們什么才是神經干細胞,其中的大部分觀點對目前的神經干細胞研究還具有非常大的指導意義。
第二篇是神經干細胞懸浮培養的 Reynolds寫的,他用自己實驗室的數據說明了神經球和神經干細胞的關系,盡管神經干細胞的存在可以用成球實驗來檢測,但是能夠成球并不一定是干細胞。他用事實說明一個細胞能成球甚至二次三次成球也不能代表它就是神經干細胞,在他的系統中,成球細胞的比例為2.4%而實際上干細胞的比例只有0.16%。
另外回答樓主為什么懸浮培養如此重要:
體外培養中,越原始的細胞的代謝要求越低,所以成熟的有功能細胞反而難以維持,培養干細胞首先要篩選出干細胞,而神經干細胞和前體細胞只要給予一定的因子刺激就能在無血清培養基中增殖,而大多數原代的成熟細胞不行。單層貼壁培養也有不少人嘗試,也是基于同樣的原則,但是方法上都不如懸浮來的成熟。
我覺得不是說神經干細胞一定要懸浮培養,而是神經干細胞培養時,不經過特殊處理,是不會貼壁生長的。可能這就是神經干細胞的體外培養特性,原因可能是其不會分泌黏附介質。
樓主所說的神經干細胞貼壁生長時,我覺得此時已不是單純的神經干細胞,而是有一部分已經分化為了其它種類的細胞,而其它種類的細胞會分泌一些黏附介質,促使神經球黏附生長。
所以說,如果需要單純的神經干細胞,還是要懸浮培養,如果需要研究其分化特性,就要使其貼壁生長了。
其實,現在對于神經干細胞的確切定義目前還是有些模糊的,像在國內很多人對stem cell 和progenitor cell 好像統稱為干細胞,其實兩者在很多方面還是有差異的:增殖能力,細胞漿表達蛋白,膜受體蛋白,離子通道...
記得很久以前在干細胞討論版塊有個帖子中提到:干細胞要稱之為干細胞,還有一個zui關鍵的特點就是:體外擴增后的細胞重新輸注體內后,除了能分化為特定的神經細胞外,還必須具有一定的可檢測的功能(好像是冷泉港實驗室提出的這個觀點)
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