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技術解析:ELISA試劑盒的顯色弱問題
顯色一定要控制時間,根據試劑盒說明操作即可。一般來說,顯色時間過短,結果偏低;顯色時間過長,空白增高或者非特異性顯色增加。
ELISA顯色弱的可能原因
對應的解決方法
超過有效期的產品可能會產生很弱的信號
檢查產品的有效期
加入試劑的體積和時間有誤
確定所使用的每一個試劑的體積正確的和加入的時間是適當的
試劑、樣品用前未能平衡
用前試劑、樣品置室溫平衡10分鐘左右
縮短孵育時間能使實驗的信號變弱
檢查孵育的時間
在溫度變化的環境內孵育酶標板
確定孵育的溫度,應避免溫度的變化
使用了被污染的試劑
檢查試劑是否被污染
標準品/標本制備方法不規范
檢查標準品/標本的制備,標準品應按說明書進行復溶和稀釋。低溫貯存的標本避免反復凍融,嚴禁使用溶血標本。樣品用NaN3防腐,抑制了酶的反應
顯色底物制備不規范
檢查底物的制備,如體積是否正確,混合是否恰當充分
檢測時間不當
是否在規定的時間內檢測
儀器設定不正確,濾光片不匹配
儀器是否設定正確,濾光片的使用等
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