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ELISA試劑盒怎樣操作咱們“實驗室見”

時間:2017-3-14閱讀:484
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ELISA試劑盒怎樣操作咱們“實驗室見”

怎么挑選ELISA試劑盒?
*步、清晰檢查何種蛋白 。
第二步、清晰編碼該蛋白的基因與其它哪些物種同源性 。
第三步、尋找檢查這些物種蛋白的試劑盒。
第四步、咨詢商家ELISA是試劑盒運用的抗體類型:多抗仍是單抗? 單抗是針對啥抗原決議簇的?
第五步、 做出自個的判別該買哪個試劑盒。

ELISA試劑盒試驗操作過程
1.運用前,將一切試劑充沛混勻。不要使液體發生很多的泡沫,防止加樣時參加很多的氣泡,發生加樣上的差錯。
2.依據待測樣品數量加上規范品的數量決議所需的板條數。每個規范品和空白孔建議做復孔。每個樣品依據自個的數量來定,能運用復孔的盡量做復孔。標本用標本稀釋液1:1稀釋后參加50ul于反響孔內。
3.參加稀釋好后的規范品50ul于反響孔、參加待測樣品50ul于反響孔內。當即參加50ul的生物素符號的抗體。蓋上膜板,悄悄振動混勻,37℃溫育1小時。
4.甩去孔內液體,每孔加滿洗刷液,振動30秒,甩去洗刷液,用吸水紙拍干。重復此操作3次。假如用洗板機洗刷,洗刷次數添加一次。
5.每孔參加80ul的親和鏈酶素-HRP,悄悄振動混勻,37℃溫育30分鐘。
6.甩去孔內液體,每孔加滿洗刷液,振動30秒,甩去洗刷液,用吸水紙拍干。重復此操作3次。假如用洗板機洗刷,洗刷次數添加一次。
7.每孔參加底物A、B各50ul,悄悄振動混勻,37℃溫育10分鐘。防止光照。
8.取出酶標板,敏捷參加50ul停止液,參加停止液后應當即測定成果。
9.在450nm波利益測定各孔的OD值。

ELISA試劑盒操作時應當留意哪些?
1.試劑應按標簽說明書儲存,運用前康復到室溫。稀稀往后的規范品應丟掉,不行保留。
2.試驗中不必的板條應當即放回包裝袋中,密封保留,防止蛻變。
3.不必的其它試劑應包裝好或蓋好。不一樣批號的試劑不要混用。保質前運用。
4.運用一次性的吸頭防止穿插污染,汲取停止液和底物A、B液時,防止運用帶金屬有些的加樣器。
5.運用干凈的塑料容器裝備洗刷液。運用前充沛混勻試劑盒里的各種成份及樣品。
6.洗刷酶標板時應充沛拍干,不要將吸水紙直接放入酶標反響孔中吸水。
7.底物A應蒸發,防止長期翻開蓋子。底物B對光敏感,防止長期露出于光下。防止用手觸摸,有毒。試驗完成后應當即讀取OD值。
8.參加試劑的次序應共同,以確保一切反響板孔溫育的時刻一樣。
9.依照說明書中標明的時刻、加液的量及次序進行溫育操作。

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