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腹瀉病原體隱孢子蟲的基因改造

時間:2015-7-20閱讀:253
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腹瀉病原體隱孢子蟲的基因改造

近期的研究表明,隱孢子蟲(Cryptosporidium)是在范圍內(nèi)引起嬰幼兒嚴重腹瀉的第二大病原體。腹瀉據(jù)估計是占到嬰幼兒總死亡案例的10.5%。引起嚴重的腹瀉的首要病原體是輪狀病毒,其次是隱孢子蟲。這種隱孢子蟲還是艾滋病患者,以及器官移植患者體內(nèi)的機會病原體。這種致病毒對于營養(yǎng)不良的兒童和免疫缺陷患者是巨大的威脅,然而至今還沒有針對隱孢子蟲的疫苗,*的一種藥物效果也很差。針對隱孢子蟲的連續(xù)培養(yǎng)系統(tǒng)、動物模型以及分子遺傳學工具都很缺乏。

美國佐治亞大學的一個課題組近期在《Nature》發(fā)表了一篇文章介紹了一種實驗體系,可以通過基因改造這種重要病原體,使得今后針對隱孢子蟲的研究更容易進行。他們建立并優(yōu)化了小球隱孢子蟲(Cryptosporidium parvum)轉染組織培養(yǎng)的細胞方法。為了獲得穩(wěn)定的轉基因隱孢子蟲,他們建立了小鼠模型能夠被這種隱孢子蟲穩(wěn)定感染。

這種隱孢子蟲的基因組可以被Cas9系統(tǒng)編輯,他們引入一些報告基因(熒光素基因),使得其對于氨基糖苷類抗生素有耐藥性。通過手術注射的方法,研究人員試圖將這種基因改造過的隱孢子蟲注入小鼠的小腸。這種小鼠是一種基因敲除的小鼠,對隱孢子蟲敏感。感染基因改造的隱孢子蟲三十天后,這些小鼠腸道和糞便中能檢測到隱孢子蟲的卵囊?;蚓庉嫼蟮碾[孢子蟲也能夠感染組織培養(yǎng)的細胞。

增加了熒光素標記基因的隱孢子蟲系統(tǒng),能夠讓科學家定量研究很多分子遺傳學特性,這些對于以后的藥物研究以及疫苗開發(fā)都提供了分子基礎。由于這種寄生蟲對于藥物不敏感,耐藥性很強。利用這種基因改造后的隱孢子蟲系統(tǒng)用于體內(nèi)或體外的藥物篩選。通過基因改造使得隱孢子蟲弱化,或許能夠成為一種有希望的疫苗。他們還測試基因敲除之后的隱孢子蟲對藥物的敏感性。他們希望通過轉基因改造這種寄生蟲為未來的研究提供基礎,并為針對隱孢子蟲的藥物研發(fā)打開了大門。

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