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片段篩選發(fā)現(xiàn)HIV逆轉錄酶抑制劑

時間:2015-6-15閱讀:384
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近日,來自澳大利亞的科學家在學術期刊PNAS發(fā)表了一項研究進展,他們通過研究發(fā)現(xiàn)了三種針對HIV-1逆轉錄酶的片段化抑制劑,能夠有效抑制HIV-1逆轉錄酶活性,為HIV-1預防和治療藥物開發(fā)提供了重要信息。


基于片段篩選的方法可用于發(fā)現(xiàn)新的活性位點或變構抑制劑以進行治療干預。在該項研究中,研究人員利用飽和轉移磁共振和體外活性實驗的方法,發(fā)現(xiàn)了HIV-1逆轉錄酶的片段抑制劑,與非核苷酸類的RT抑制劑(NNRTI)和核苷酸RT抑制劑(NRTI)相比,這種片段抑制劑在化學結構和作用機制上存在很大不同。


研究人員鑒定出三種化合物能夠抑制HIV-1逆轉錄酶的RNA和DNA依賴性DNA聚合酶活性,作用濃度在微摩級別但仍保留了抑制突變型逆轉錄酶的效能,其中包括抵抗NNRTI作用的三種突變:K103N,Y181C和G190A。這些化合物還能抑制莫洛尼鼠白血病病毒逆轉錄病毒的活性,但對E.coli DNA聚合酶I的Klenow片段沒有抑制作用。


研究人員還進行了平衡態(tài)動力學分析,結果表明其中一個片段是HIV-1逆轉錄酶的競爭性抑制劑,專門作用于dNTP底物,而另一種化合物是逆轉錄酶聚合酶活性的競爭性抑制劑,專門作用于DNA模版/引物,因此這種化合物還能抑制RNase H活性。除此之外,這種dNTP競爭性逆轉錄酶抑制劑還保留了對抗NRTI抵抗型突變K65R和M184V的活性。在另一項抗病毒實驗中,研究人員證明模版/引物競爭性復合物能夠抑制HIV-1復制。hz1106    賴氨酸鐵瓊脂    250g    用于賴氨酸、硫化氫試驗
    Lysine Iron Agar        
hz1107    EF-18瓊脂    250g    用于濾膜法篩選食品中沙門氏菌,使用前加入無菌過濾的新生霉素,zui終濃度0.015g/L(SN/T 1059.1)
    EF-18 Agar        
hz1108    RVS肉湯    250g    用于沙門氏菌選擇性增菌培養(yǎng)(ISO標準)
    Rappaport-Vassiliadis Soya Broth        
金黃色葡萄球菌檢測培養(yǎng)基            
貨號    產(chǎn)品名稱    規(guī)格    產(chǎn)品說明與用途
hz1015    胰蛋白胨大豆肉湯    250g    用于金黃色葡萄球菌的MPN測定,增菌培養(yǎng),NaCl濃度可根據(jù)需要而調整(GB,SN標準)
    Trypticase (Tryptic) Soy Broth        
hz1072    Baird-Parker?瓊脂基礎    250g    用于金黃色葡萄球菌的選擇性分離培養(yǎng)(GB,SN,F(xiàn)DA標準)
    Baird-Parker Agar Base        
hz1073    改良Giolitti-Cantoni肉湯    250g    用于金黃色葡萄球菌的增菌培養(yǎng)(ISO標準)
    Giolitti-Cantoni Broth        
hz1074    7.5%氯化鈉肉湯    250g    用于金黃色葡萄球菌的增菌培養(yǎng)(GB標準)
    7.5% Sodium Chloride Broth        
hz1007    營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基    250g    用于金黃色葡萄球菌的增菌培養(yǎng)(SN標準)
    Broth Medium        
hz1111    亞碲酸鈉肉湯培養(yǎng)基基礎    250g    用于金黃色葡萄球菌增菌培養(yǎng),每100ml 培養(yǎng)基需另加入1%亞碲酸鈉1ml
    Yolk lurite Broth Base        
hz1112    葡萄球菌增菌肉湯    250g    用于凝固酶陽性葡萄球菌的選擇性增菌
    Staphylococcus Enrichment Broth        
hz1113    葡萄球菌選擇性瓊脂    250g    用于凝固酶陽性葡萄球菌的選擇性分離培養(yǎng)
    Staphylococcus Selective Aga        
hz1114    卵黃甘露醇高鹽瓊脂基礎    250g    用于食品中金黃色葡萄球菌的選擇性分離培養(yǎng)
    Egg-Manitol Salt Agar        
hz1115    血液瓊脂基礎    250g    供分離營養(yǎng)要求較高的致病菌用,后加血液制成血平板
    Blood Agar Base        
hz1020    腦心浸出液肉湯    250g    用于營養(yǎng)要求較高的微生物的培養(yǎng)
    Brain Heaet Infusion Broth        
hz1021    哥倫比亞瓊脂    250g    用于營養(yǎng)要求較高的微生物的培養(yǎng)及溶血試驗
    Columbia Agar Base        
hz1118    甘露醇氯化鈉瓊脂    250g    用于金黃色葡萄球菌選擇性分離培養(yǎng)
    Mannitol Salt Agar        
hz1119    甘露醇發(fā)酵培養(yǎng)基    250g    用于鑒別金黃色葡萄球菌發(fā)酵試驗
    Mannitol Ferment Medium        
hz1120    甲苯胺藍-DNA瓊脂    250g    用于金黃色葡萄球菌核酸酶試驗
    Toluidine Blue -DNA Agar        
酵母、霉菌檢測培養(yǎng)基            
hz1121    察氏瓊脂    250g    用于青霉,曲霉鑒定及保存菌種用(GB標準)
    Czapek Dox Agar        


綜上所述,這項研究通過化合物篩選的方法發(fā)現(xiàn)三種片段具有對抗HIV-1逆轉錄酶活性的強大功能。這些片段化抑制劑的發(fā)現(xiàn)為HIV-1預防及治療新藥的開發(fā)提供了新的契機,具有非常重要的意義

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