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小鼠過氧化還原酶6(PRDX6)試劑盒*

時間:2014-8-8閱讀:869
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ELISA試劑盒方法的基本操作原理介紹

常用的小鼠過氧化還原酶6(PRDX6)試劑盒法有雙抗體夾心法和間接法,前者用于檢測大分子抗原,后者用于測定特異抗體。酶聯免疫吸附試驗:是酶免疫測定技術中應用zui廣的技術。其基本方法是將已知的抗原或抗體吸附在固相載體( 聚苯乙烯微量反應板 )表面,使酶標記的抗原-抗體反應在固相表面進行,用洗滌法將液相中的游離成分洗除。

1、競爭ELISA:此法主要用于測定小分子抗原及半抗原,其原理類似于放射免疫測定。

其基本程序為:

抗體包被 4℃過夜,洗滌三次、拋干

加入待檢抗原及一定量的酶標抗原小鼠過氧化還原酶6(PRDX6)試劑盒(對照孔僅加酶標抗原)→ 37 60分鐘,洗滌三次、拋干

加底物液 37 20分鐘,加終止液

ELISA檢測儀測定OD值。

   被結合的酶標抗原的量由酶催化底物反應產生有色產物的量來確定,如果待檢溶液中抗原越多,被結合的標記抗原的量就越少,有色產物就減少,這樣根據有色產物的變化就可求出未知抗原的量。此法的優點在于快速、特異性高、且可用于小分子抗原及半抗原的檢測;其主要不足在于每種抗原都要進行酶標記,而且因為抗原的結構不同,還需應用不同的結合方法。此外試驗中應用酶標抗原的量較多。

2、阻斷ELISA

   本法主要用于檢測型特異性抗體。該方法現已成為豬傳染性胃腸炎(TGE)、豬偽狂犬病(PR)及豬胸膜肺炎(AP)的主要檢測方法。

下面以AP2型抗體的阻斷ELISA檢測法為例介紹其操作程序:

100μl AP2型工作量抗原包被 4℃過夜,洗滌三次、拋干

200μl阻斷緩沖液進行封閉 37 60分鐘,洗滌三次、拋干

加工作量1:4稀釋被檢豬血清100μl 37 60分鐘,洗滌三次、拋干

100μl工作量兔抗AP2型血清 37 30分鐘,洗滌三次、拋干

100μl工作量豬抗兔IgG-HRP 37 60分鐘,洗滌三次、拋干

100μl OPD底物液 37 20分鐘,加終止液

ELISA檢測儀測定OD值。

本試驗同時設標準陰、陽性血清對照、兔抗AP2型陽性對照、空白對照。

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