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綠色熒光蛋白標記小鼠子宮頸癌細胞,U14-GFP細胞培養(yǎng)的污染類型及處理
污染是細胞培養(yǎng)的大敵。預防和避免污染是細胞培養(yǎng)成功的關鍵之一。一開始就要十分重視,應積極采取措施,防止污染,否則會前功盡棄,不僅浪費時間,而且浪費人力、物力,甚至造成無法彌補的損失。
細菌污染 | 可能原因 | 建議解決方法 |
細菌污染是實驗室細胞培養(yǎng)中常見的污染,即使在細胞培養(yǎng)液中加入了抗菌素(一般為預防劑量),也可能因為操作不慎而引起污染。zui常見的有革蘭氏陽性菌,如枯草桿菌以及大腸桿菌、假單胞菌等革蘭氏陰性菌,其中又以白色葡萄球菌較常見。 | 培養(yǎng)細胞受細菌污染后,會出現(xiàn)培養(yǎng)液變混濁,pH改變。也有的培養(yǎng)液肉眼觀察無多少改變,只能在鏡下發(fā)現(xiàn)菌體才知污染。所以,每天應仔細觀察。污染后細胞發(fā)生病理改變,胞內(nèi)顆粒增多、增粗,zui后變圓脫落死亡,造成試驗失敗和細胞株(系)丟失。
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真菌污染 | 可能原因 | 建議解決方法 |
真菌污染是細胞培養(yǎng)過程中zui常見的一種,尤其在霉雨季節(jié)進行細胞培養(yǎng)更易污染。zui常見的真菌有煙曲霉、黑曲菌、孔子霉、毛霉菌、白色念珠菌和酵母菌。
| 培養(yǎng)細胞受細菌污染后,會出現(xiàn)培養(yǎng)液變混濁,pH改變。綠色熒光蛋白標記小鼠子宮頸癌細胞,U14-GFP細胞也有的培養(yǎng)液肉眼觀察無多少改變,只能在鏡下發(fā)現(xiàn)菌體才知污染。所以,每天應仔細觀察。污染后細胞發(fā)生病理改變,胞內(nèi)顆粒增多、增粗,zui后變圓脫落死亡,造成試驗失敗和細胞株(系)丟失。 |
五、非同種細胞污染
由于細胞培養(yǎng)操作時各細胞株所需的器材和溶液沒有嚴格分開,操作不當,往往會使一種細胞被另一種細胞污染。如“靈長類”細胞系發(fā)現(xiàn)猴和鼠類細胞的混合物,ERK/KD細胞是從兔腎中分離出來的,而現(xiàn)在句卻認為是HeLa細胞。目前,世界上已有幾十種細胞都被HeLa細胞所污染,致使許多實驗宣告無效。
非細胞培養(yǎng)物所造成的化學成分的污染也偶有發(fā)生,大多是由于細胞培養(yǎng)所需物品清洗消毒不*而帶入一些有毒化學物質(zhì)所致。
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