由于超濾管使用不恰當或是超濾知識缺乏引起的問題，導致實驗不順利，經常得不到目標蛋白，要么就是蛋白損失很大。怎么辦呢？

• 為什么我截留分子量選擇沒錯，蛋白有時候卻會漏出在濾出液中？
• 為什么我用濃縮后的蛋白做下游分析的時候發現有干擾？
• 用超濾管來分離兩種蛋白可以嗎？
• 有時候我用超濾離心管連水都離不下來，可能的原因是？
• 超濾管可以用來脫鹽和濃縮核酸嗎？
• 如何給超濾管滅菌？

你是否遇到過諸如以上問題？

別著急，小編為您總結以上問題的解決方法！！

1、為什么我截留分子量選擇沒錯，蛋白有時候卻會漏出在濾出液中？

導致漏蛋白甚至檢測不到蛋白的原因很復雜，應優先根據樣品調整工藝，因為同一種膜、截留分子量和裝置組合對于不同的蛋白質類別甚至物種而言可能并非*之選。

在選擇過程中，應首先執行以下步驟：
1、考慮樣品和分子特性：比如改變pH 可能增加構象改變的風險，而降低溫度可能降低濃縮效率等。
2、選擇正確的膜：*，超濾沒有太多的膜選項，但您應對再生纖維素（RC）、Hydrosart 和聚醚砜（PES）材料進行測試，以確定哪種材料可為您的特定材料提供z低的非特異性結合和*的回收率。
3、選擇合適的截留分子量，通常是靶標1/3大小的截留分子量z適合。但有時則需要更小的孔徑來滿足回收率的要求。如果在病毒和核酸樣品，可參看下面截留分子量和病毒顆粒分子大小以及核酸大小的換算表。
4、選擇合適的裝置：賽多利斯擁有適用于低濃度樣品、DNA、蛋白質、病毒、過濾應用等廣泛的裝置選項；選擇合適的裝置可以有效改善結果。
5、使用合適的裝置處理方法：例如預沖洗以去除分析物或用非干擾蛋白沖洗以鈍化結合位點并減少損失。
6、考慮樣品控制方法，例如使用裝置內的“死體積”移走所有截留物，或預灌裝濾液管以控制截留物的z終體積。

2、為什么我用濃縮后的蛋白做下游分析的時候發現有干擾？

超過濾薄膜含有微量甘油和die氮化鈉。如果此材料干擾分析，可用緩沖液或去離子水預清洗。如果干擾仍然存在，用 0.1 N NaOH 清洗，然后用緩沖液或去離子水再次清洗后甩干。如果必須用NaOH處理的時候，推薦試用聚醚砜（PES）膜，因為比（再生纖維素）RC膜更耐NaOH，同時提醒NaOH不能過夜浸泡。

3、用超濾管來分離兩種蛋白可以嗎？

因為超濾膜的孔徑不是規則的結構，所以不能進行精確的分離，所以按照經驗，我們推薦兩個蛋白的分子量要相差一個數量級（10倍）以上才可以進行分離。另外，賽多利斯的300k，1000k和0.2um的超濾管可以實現10倍以上分子量差異的蛋白粗分離。

4、有時候我用超濾離心管連水都離不下來，可能的原因是什么呢？
超過濾薄膜含有微量甘油。如果出現這種情況，先用0.1 N NaOH 清洗再離心。z后用緩沖液或去離子水水再次清洗后甩干。清洗后的濾膜應立即使用，如暫時不用，請保持潤濕狀態，避免重新干燥。另外，有些水的水質本身雜質較多，或是不同水機對水的處理效果有差異，這個時候可以檢查是否水機工作正常，然后用 0.2 μm 的針頭濾器過濾水，然后在進行超濾，效果可能會好很多！

 5、超濾管如何進行滅菌？
70 % 乙醇滅菌，不可以用高壓高溫滅菌。所有超濾管都可以用 70 % 乙醇和環氧乙烷（EtO）處理，以進行滅菌。但請注意，尚未對處理后滅菌進行任何研究。對于DNA 研究，已對Vivacon® PCR 等級系列進行了EtO 處理，以失活任何干擾的痕量DNA。