今日技術(shù)推薦-雞冠中透明質(zhì)酸的提取
透明質(zhì)酸（Hyaluronicacid）簡稱HA，是一種酸性粘多糖，廣泛存在于動(dòng)物的組織細(xì)胞間質(zhì)(基質(zhì))和某些細(xì)菌的莢膜中。Meyer和Palmer等人于1934年從牛眼玻璃體中分離出的一種高粘性物質(zhì)，并隨之命名為透明質(zhì)酸。Kendell等于1937年從細(xì)菌體內(nèi)提取到HA。在臨床上，透明質(zhì)酸用于視網(wǎng)膜脫離手術(shù)，是眼科手術(shù)中*的藥品；同時(shí)，透明質(zhì)酸是理想的保濕因子，廣泛用于化妝品中。
HA的生產(chǎn)工藝主要分為兩大類，以動(dòng)物組織為原料的提取法和細(xì)菌發(fā)酵法。幾乎所有的動(dòng)物組織中均含有HA，只是含量不同，能夠用于生產(chǎn)的原料主要為雞冠和人臍帶。從雞冠中生產(chǎn)透明質(zhì)酸具有廣闊的市場。
1工藝流程
2操作要點(diǎn)
2.1預(yù)處理新鮮公雞冠，投入丙酮中，浸泡24h至雞冠變硬為止，然后置瓷盤中于干燥箱干燥，干燥后用粉碎機(jī)粉碎成粉狀。
2.2提取將粉狀物倒入燒杯中，加入6～7倍去離子水，攪拌均勻，靜置浸泡過夜，使雞冠粉充分溶脹，收集濾液，濾渣再按同樣方法浸泡兩次，合并濾液。
2.3除雜物將濾液移入燒杯中，不斷攪拌加入10％的固體乙酸鈉，*溶解后，加入等體積的氯仿、正丁醇溶液（氯仿：正丁醇為4：1），攪拌三小時(shí)左右，然后靜置分層，虹吸出上層水相（注意千萬不可吸出氯仿、正丁醇）。
2.4沉淀將上述水相倒入另一燒杯中，不斷攪拌加入2倍體積的95％乙醇，靜置沉淀過夜，虹吸出上層乙醇溶液（可回收乙醇），過濾得沉淀物，干燥后即為HA粗品。
2.5分離將粗品溶于4倍體積的0.1摩爾/升乙酸鈉溶液中，攪拌下用2％的三氟乙酸調(diào)節(jié)溶液的pH值至4.5～5.0，加入等體積的氯仿、正丁醇溶液，攪拌均勻，靜置分層后，虹吸收集上層水相，再往水相中加等體積的氯仿、正丁醇溶液，靜置分層后，吸出上層水相，移入另一燒杯中。
2.6酶處理在以上水相中，先用8％的NaOH溶液調(diào)節(jié)水相的pH值為7.5左右，加熱至37℃恒溫，加入鏈酶蛋白酶，保溫過夜，得酶解液。
2.7再次除雜物在上述酶解液中加入等體積的氯仿、正丁醇溶液，攪拌均勻，靜置分層后，吸出上層水相，水相再加氯仿、正丁醇溶液，按相同方法處理2次，合并上層水相，下層液體供回收氯仿用。
2.8十六烷基*基*（CTAB）沉淀將吸出的水相移入燒杯中，攪拌下加入等體積1％的十六烷基*基*溶液，靜置過夜，濾除清液，收集沉淀物。
2.9溶解將十六烷基*基*的沉淀物用2～3倍體積的0.8摩爾/升氯化鈉溶液攪拌解離30～40min，然后用離心機(jī)離心10min，除去沉淀，收集解離液。
2.10乙醇沉淀把解離液倒入燒杯中，攪拌下加入3倍體積的95％乙醇，靜置沉淀7～8小時(shí)，虹吸除去上層乙醇液（供回收乙醇）。下層沉淀再加95％乙醇反復(fù)沉淀2次，收集下層沉淀物，吊濾至干。
2.11干燥將吊干的產(chǎn)品用丙酮洗滌2次，或放在真空干燥箱中干燥，至*干燥即得精品。
3工藝說明
①用去離子水提取透明質(zhì)酸，可防止*的混入，便于下一步純化，收率較高。
②加鏈酶蛋白酶，分級沉淀等溫和條件，可保持透明質(zhì)酸的大分子特性，并有效地除去蛋白質(zhì)和核酸等雜物。
③用乙醇沉淀透明質(zhì)酸水提取液時(shí)，有纖維狀和粉狀兩種沉淀產(chǎn)生，纖維狀飄浮于乙醇上部，粉狀在乙醇下部。但在強(qiáng)酸條件下，用氯仿處理提取液沉淀時(shí)，纖維狀沉淀消失，溶液粘度明顯降低。這說明纖維狀沉淀與透明質(zhì)酸大分子特性及溶液濃度有關(guān)。當(dāng)溶液濃度小于0.05％時(shí)，透明質(zhì)酸分子大多獨(dú)立存在，當(dāng)濃度大于0.1％時(shí)，部分交織成網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)。據(jù)分析，這種網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)物質(zhì)沉淀下來呈現(xiàn)纖維狀，部分散在的分子沉淀下來呈粉狀。
4結(jié)束語
應(yīng)用酶解法從雞冠中提取得到透明質(zhì)酸，工藝簡單，生產(chǎn)環(huán)節(jié)少，降低了對透明質(zhì)酸的破壞，生產(chǎn)同一批號的透明質(zhì)酸性能相近，說明工藝穩(wěn)定可靠。
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