人白細胞介素-8(IL-8)酶聯免疫試劑盒使用說明
本試劑盒適用于以下樣本的測試（黑底字體為適用樣本）：
血清、血漿- 組織勻漿 –腹水 –細胞培養上清
本試劑盒僅供研究，不用于臨床診斷
目錄
- 實驗原理
- 試劑盒組成
- 試劑盒保存
- 需要而未提供的試劑和器材
- 樣本前處理
- 洗板方法
- 詳細操作程序
- 操作總結
- 性能參數
- 實驗原理：本試劑盒采用的是*雙抗體夾心酶聯免疫吸附法（ELISA）測定樣品中人白細胞介素-8(IL-8)的水平。向預先包被了人白細胞介素-8(IL-8)單克隆抗體的酶標孔中加入白細胞介素-8(IL-8)，溫育；溫育后，加入*標記的抗IL-8抗體，再與鏈霉親和素-HRP結合，形成免疫復合物，再經過溫育和洗滌，去除未結合的酶，然后加入底物A、B，產生藍色，并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺與樣品中人白細胞介素-8(IL-8)的濃度呈正相關。
2.試劑盒組成：
1 | 標準品（400 ng/L） | 0.5ml | 7 | 顯色劑A液 | 3ml |
2 | 標準品稀釋液 | 3ml | 8 | 顯色劑B液 | 3ml |
3 | 酶標包被板 | 12孔×4條 | 9 | 終止液 | 3ml |
4 | 鏈霉親和素-HRP | 3ml | 10 | 說明書 | 1份 |
5 | 20倍濃縮洗滌液 | 20ml | 11 | 封板膜 | 2張 |
6 | *標記的抗- IL-8抗體 | 1ml | 12 | 密封袋 | 1個 |
3.試劑盒保存
- 2-8℃下保存6個月，在-20℃下可以保存更長的時間。酶標板為真空包裝，板條可以拆卸，拆開以后如一次不能用完，請放入提供的密封袋中，放入干燥劑，2-8℃保存，在一個月之內仍然有效。試劑不能反復凍融。
4．需要而未提供的試劑和器材
- 37℃恒溫箱。
- 標準規格酶標儀。
- 精密移液器及一次性吸頭
- 雙蒸水或超純水
- 干凈的試管或Eppendof管
- 吸水紙
5樣本前處理
- 標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融
b.血清：室溫血液自然凝固10-20分鐘，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清，保存過程中如出現沉淀，應再次離心。
c.血漿：應根據標本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。
d.尿液：用無菌管收集，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。
e.細胞培養上清：檢測分泌性的成份時，用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。檢測細胞內的成份時，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細胞懸液，細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復凍融，以使細胞破壞并放出細胞內成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。
f.組織標本：切割標本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存備用。標本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。 - 洗板方法
- 手工洗板：先洗去酶標孔中的的液體，在吸水紙上拍干，然后每孔加入300μl稀釋好的洗滌液，輕輕搖晃30秒，然后甩掉，在吸水紙上拍干，重復4-5次。
- 洗板機洗板：洗板機洗板比較便捷，但應操作熟練后使用。
- 詳細操作程序
- 使用前請先將試劑盒在室溫下平衡半小時。
- 標準品的稀釋：（本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶請按照說明自行在小試管中倍比稀釋）：
200 ng/L | （5號標準品） | 120μl的原倍標準品加入120μl的標準品稀釋液 |
100 ng/L | （4號標準品） | 120μl的5號標準品加入120μl的標準品稀釋液 |
50ng/L | （3號標準品） | 120μl的4號標準品加入120μl的標準品稀釋液 |
25 ng/L | （2號標準品） | 120μl的3號標準品加入120μl的標準品稀釋液 |
12.5 ng/L | （1號標準品） | 120μl的2號標準品加入120μl的標準品稀釋液 |
- 根據待測樣品數量加上標準品的數量決定所需的板條數。每個標準品和空白孔建議做復孔。每個樣品根據自己的數量來定，能使用復孔的盡量做復孔。
- 加樣：1）空白孔：空白對照孔不加樣品，*標記的抗IL-8抗體，鏈霉親和素-HRP，只加顯色劑A&B和終止液，其余各步操作相同；2）標準品孔：加入標準品50μl，*-HRP50μl（標準品中已事先整合好*抗體，故不加）；3)待測樣品孔:加入樣本40μl，然后各加入抗- IL-8抗體10μl、鏈酶親和素-HRP50μl，蓋上封板膜，輕輕振蕩混勻，37℃溫育60分鐘。
- 配液：將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用。
- 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。
- 顯色：每孔先加入顯色劑A 50μl，再加入顯色劑B 50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色10分鐘。
- 終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。
- 測定：以空白空調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應在加終止液后10分鐘以內進行。
9.根據標準品的濃度及對應的OD值計算出標準曲線的直線回歸方程，再根據樣品的OD值在回歸方程上計算出對應的樣品濃度。也可以使用各種應用軟件來計算。
- 操作總結
準備試劑，樣品和標準品
加入準備好的樣品和標準品，*標記二抗和酶標試劑，37℃反應60分鐘
洗板5次，加入顯色液A、B，37℃顯色10分鐘
加入終止液
10分鐘之內讀OD值
計算
- 性能參數
- 批內差：CV＜10%
- 批間差：CV＜12%
- 檢測范圍：1ng/L→380ng/L
- 保存： 2-8℃
- 規格： 96T/盒
- 有效期： 6個月（2-8℃）。
