免疫組織化學(xué)又稱免疫細(xì)胞化學(xué)，是指帶顯色劑標(biāo)記的特異性抗體在組織細(xì)胞原位通過(guò)抗原抗體反應(yīng)和組織化學(xué)的呈色反應(yīng)，對(duì)相應(yīng)抗原進(jìn)行定性、定位、定量測(cè)定的一項(xiàng)新技術(shù)。免疫組織化學(xué)的方法有多種，其實(shí)都大同小異，不同點(diǎn)只是在于顯色基團(tuán)！
SP法
1）脫蠟、水化；
2）PBS洗2～3次各5分鐘；
3）3%H2O2（80%甲醇）滴加在TMA上，室溫靜置10分鐘；
4）PBS洗2～3次各5分鐘；
5）抗原修復(fù)；
6）PBS洗2～3次各5分鐘；
7）滴加正常山羊血清封閉液，室溫20分鐘。甩去多余液體。
8）滴加Ⅰ抗50μl，室溫靜置1小時(shí)或者4℃過(guò)夜或者37℃1小時(shí)。
9）4℃過(guò)夜后需在37℃復(fù)溫45分鐘。
10）PBS洗3次各5分鐘；
11）滴加Ⅱ抗40～50μl，室溫靜置，或37℃1小時(shí)；
12）II抗中可加入0.05%的tween-20。
13）PBS洗3次各5分鐘；
14）DAB顯色5～10分鐘，在顯微鏡下掌握染色程度；
15）PBS或自來(lái)水沖洗10分鐘；
16）蘇木精復(fù)染2分鐘，鹽酸酒精分化；
17）自來(lái)水沖洗10～15分鐘；
18）脫水、透明、封片、鏡檢。
SABC法
1）脫蠟、水化。
2）PBS洗兩次各5分鐘。
3）用蒸餾水或PBS配置新鮮的3%H2O2，室溫封閉5～10分鐘，蒸餾水洗3次。
4）抗原修復(fù)。
5）PBS洗5分鐘。
6）滴加正常山羊血清封閉液，室溫20分鐘。甩去多余液體。
7）滴加Ⅰ抗，室溫1小時(shí)或者4℃過(guò)夜或者37℃1小時(shí)（4℃過(guò)夜后在37℃復(fù)溫45分鐘）。
8）PBS洗三次每次2分鐘。
9）滴加*化二抗，20℃～37℃20分鐘。
10）PBC洗3次每次2分鐘。
11）滴加試劑SABC，20℃～37℃20分鐘。
12）PBS洗4次每次5分鐘。
13）DAB顯色：DAB顯色試劑盒或者自配顯色劑顯色（鏡下掌握顯色程度）。
14）蒸餾水洗。蘇木素復(fù)染2分鐘、鹽酸酒精分化。
15）脫水、透明、封片、鏡檢。
二者區(qū)別：
sp法是：一抗＋*化二抗＋HRP標(biāo)記的鏈霉卵白素（HRP標(biāo)記的親和素）
酶標(biāo)親和素-*技術(shù)（labelledavidin-biotintechnique，簡(jiǎn)稱LAB法）。即用辣根過(guò)氧化物酶直接標(biāo)記avidin，用biotin標(biāo)記2抗。
關(guān)鍵步驟為3步：
Ag+Ab1+（Ab2-B）+A★
（A★為HRP標(biāo)記的卵白素）A★與2抗的*結(jié)合，avidin起橋聯(lián)作用。如將該法中的卵白素（avidin）變換成鏈霉卵白素（streptavidin），LAB法即成LsAB法，或稱SP法。
據(jù)認(rèn)為L(zhǎng)AB法比ABC法敏感2~4倍，而LsAB法因streptavidin不與組織細(xì)胞中內(nèi)源性*結(jié)合而特異性更高。現(xiàn)在SP法已趨于取代ABC法而廣為應(yīng)用。
sabc法是：一抗＋*化二抗＋abc復(fù)合物（是使用前親和素與酶聯(lián)*現(xiàn)配使用）
親和素-*-過(guò)氧化物酶復(fù)合物技術(shù)（avidin-biotin-peroxidasecomplextechnique，簡(jiǎn)稱ABC法）。
關(guān)鍵的程序步驟為3步：
Ag+Ab1+（Ab2-B）+AB★C復(fù)合物
（Ab2-B為*標(biāo)記的第二抗體）（B★為*標(biāo)記的過(guò)氧化物酶）AB★C復(fù)合物是avidin與酶聯(lián)biotin1比1在使用前30min配置，混勻。1個(gè)avidin分子結(jié)合了3個(gè)biotin分子，剩下1個(gè)結(jié)合點(diǎn)與2抗的*結(jié)合，avidin起橋聯(lián)作用。ABC法敏感性更高，比PAP法敏感20~40倍，背景也更清晰。
個(gè)人理解：SP法和SABC法相差不大，一般都可以用.
SP法：
一抗+*標(biāo)記二抗+辣根酶標(biāo)記鏈霉卵白素+辣根酶底物顯色
SABC法：
一抗+*標(biāo)記二抗+滴加試劑SABC（鏈霉卵白素+辣根酶標(biāo)記*）+辣根酶底物顯色
比較可知，SABC法SP法在原理上基本是一樣的。但由于SABC法第3步有放大作用，所以更靈敏一些.可能會(huì)出現(xiàn)用SABC法可以做出結(jié)果的，用SP法做不出來(lái).總的來(lái)說(shuō)，個(gè)人認(rèn)為SABC法可能好一些！我自己以及周圍的同學(xué)以前一般都是選用SABC法！
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