從樣品中分離提純同種細胞，是許多下游應(yīng)用的關(guān)鍵一步，分離得到的細胞可以用于基因鑒定、細胞計數(shù)、生化分析、蛋白分離、宿主-病原體互作以及細胞間相互作用等研究。

一款合適的細胞分離試劑盒可以說是實驗成功的保障，因為只有獲得正確的細胞，下游的分析結(jié)果才可能準(zhǔn)確。目前，市面上有多種多樣的分離試劑盒可供選擇，它們的主要區(qū)別在于分離方法和篩選標(biāo)志。那么，如何選擇自己的細胞分離試劑盒呢？希望本文能為你提供一些幫助。

正向選擇VS負向選擇

細胞分離試劑盒的工作原理主要有兩種，正向選擇和負向選擇。正向選擇的試劑盒，使用與目標(biāo)細胞直接結(jié)合的抗體來進行捕獲。這種抗體通常與磁珠相連，可以利用磁鐵將懸液中的抗體-磁珠-細胞復(fù)合物提取出來，再通過二抗將磁珠與目標(biāo)細胞分開。負向選擇的試劑盒也采用類似的抗體包被磁珠，不過這種試劑盒是通過去除樣品中的非目的細胞，來間接捕獲目的細胞。

這兩種細胞分離試劑盒如何取舍，主要取決于目標(biāo)細胞的表面是否具有特異性強的篩選標(biāo)志。這樣的篩選標(biāo)志能夠?qū)崿F(xiàn)特異性的捕獲，避免所獲得的細胞被非目標(biāo)細胞污染。如果你的目標(biāo)細胞剛好具有這樣的篩選標(biāo)志，那么正向選擇的細胞分離試劑盒就是*選擇。但如果目標(biāo)細胞并不具有特異性強的篩選標(biāo)志，那我們還是選用負向選擇的細胞分離試劑盒。

篩選標(biāo)志的確定

通過PubMed等數(shù)據(jù)庫中的文獻，我們一般可以確定在目標(biāo)細胞上表達的篩選標(biāo)志。如果文獻中找不到適合自己的表面標(biāo)志，我們還可以用目標(biāo)細胞的DNA序列進行BLAST搜索。BLAST搜索結(jié)果會顯示，目標(biāo)細胞上可能表達的表面標(biāo)志，在此基礎(chǔ)上可以選取用于捕獲的細胞表面蛋白。舉例來說，對一個T細胞進行BLAST搜索，結(jié)果會顯示該細胞是否表達CD4或CD8。在得知目標(biāo)細胞表達CD4之后，我們可以先對樣品進行一個免疫實驗（如ELISA），以檢驗BLAST搜索的結(jié)果。一旦證實目標(biāo)細胞的確表達CD4，我們就可以用相應(yīng)試劑盒來篩選CD4陽性的T細胞。

一般流程

對于一個旨在分離CD4陽性T細胞的試劑盒來說，操作流程主要有以下幾步。首先，將樣品與anti-CD4抗體包被的磁珠共同孵育，使抗體與CD4+ T細胞結(jié)合。然后洗去不需要的非目標(biāo)細胞（即不表達CD4的細胞），留下磁珠-抗體-細胞復(fù)合物。將上述復(fù)合物與能結(jié)合anti-CD4抗體的二抗一起孵育，二抗就會替代CD4+T細胞，形成磁珠-抗體-二抗復(fù)合物。我們可以用磁鐵去除這種磁珠-抗體-二抗復(fù)合物，而所有的CD4+細胞留在上清中。zui后，只需將上清轉(zhuǎn)移就可以進行下游研究了，上海友騰生物傾力為客戶提供上萬種科研試劑，提供*、zui全、zui有效的科研試劑產(chǎn)品，質(zhì)量被全國各大院校科研機構(gòu)認可。

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