酶標(biāo)儀原理
酶標(biāo)儀實際上就是一臺變相的光電比色計或分光光度計，其基本工作原理與主要結(jié)構(gòu)和光電比色計基本相同. 圖示是一種單通道自動進(jìn)樣的酶標(biāo)儀工作原理圖.光源燈發(fā)出的光波經(jīng)過濾光片或單色器變成一束單色光，進(jìn)入塑料微孔極中的待測標(biāo)本.該單色光一部分被標(biāo)本吸收，另一部分則透過標(biāo)本照射到光電檢測器上，光電檢測器將這一待測標(biāo)本不同而強弱不同的光信號轉(zhuǎn)換成相應(yīng)的電信號.電信號經(jīng)前置放大，對數(shù)放大，模數(shù)轉(zhuǎn)換等信號處理后送入微處理器進(jìn)行數(shù)據(jù)處理和計算，zui后由顯示器和打印機顯示結(jié)果. 微處理機還通過控制電路控制機械驅(qū)動機構(gòu)X方向和Y方向的運動來移動微孔板，從而實現(xiàn)自動進(jìn)樣檢測過程.而另一些酶標(biāo)儀則是采用手工移動微孔板進(jìn)行檢測，因此省去了X,Y方向的機械驅(qū)動機構(gòu)和控制電路，從而使儀器更小巧，結(jié)構(gòu)也更簡單.
   微孔板是一種經(jīng)事先包理于放置待測樣本的透明塑料板，板上有多排大小均勻一致的小孔，孔內(nèi)都包埋著相應(yīng)的抗原或抗體，微孔板上每個小孔可盛放零點幾毫升的溶液.
光是電磁波，波長100nm～400nm稱為紫外光，400nm～780nm之間的光可被人眼觀察到，大于780nm稱為紅外光。人們只所以能夠看到色彩，是因為光照射到物體上被物體反射回來。綠色植物之所以是綠色，是因為植物吸收的大部分為紅橙光和藍(lán)紫光，但對綠色不吸收，反射出來，所以植物呈現(xiàn)為綠色。酶標(biāo)儀測定的原理是在特定波長下，檢測被測物的吸光值。
酶標(biāo)儀檢測單位光通過被檢測物，前后的能量差異即是被檢測物吸收掉的能量，特定波長下，同一種被檢測物的濃度與被吸收的能量成定量關(guān)系。

檢測單位用OD值表示， OD是optical density（光密度）的縮寫，表示被檢測物吸收掉的光密度， OD=1og（1/trans），其中trans為檢測物的透光值。根據(jù)Bouger-amberT-beer法則，OD值與光強度成下述關(guān)系：E=OD=logΙ0/Ι 其中E表示被吸收的光密度，Ι0 為在檢測物之前的光強度，Ι為從被檢測物出來的光強度。
   OD值由下述公式計算：
   E=OD=C×D×E
   C為檢測物的濃度 D為檢測物的厚度 E為摩爾因子
在特定波長下測定每一種物質(zhì)都有其特定的波長，在此波長下，此物質(zhì)能夠吸收zui多的光能量。如果選擇其它的波長段，就會造成檢測結(jié)果的不準(zhǔn)確。因此，在測定檢測物時，我們選擇特定的波長進(jìn)行檢測，稱為測量波長。
   但是每一種物質(zhì)對光能量還存在一定的非特異性吸收，為了消除這種非特異性吸收，我們再選取一個參照波長，以消除這個不準(zhǔn)確性。在參照波長下，檢測物光的吸收zui小。檢測波長和參照波長的吸光值之差可以消除非特異性吸收。
   檢測值計算
   儀器中的檢測器接收透過被檢測物的光能量，轉(zhuǎn)換成二進(jìn)位數(shù)字信號，zui大為4095。儀器定義沒有光源下的透光值為 0%，沒有檢測物的透光值為100%。則實際檢測中，檢測物的透光值均在 0%一100%之間。透光值
的計算如下：T=（Meas—Min）/（Max—Min）其中T為透光值， Meas為檢測的二進(jìn)位數(shù)值， Min為在 0%的情況下檢測的二進(jìn)位數(shù)值， Max為在100%的情況下檢測的二進(jìn)位數(shù)值，舉例如下：MaX=3600 Mn=20 Meas=30T=（30-20）/3600-20）=0．0028OD=1og（1/T）=1og（1/0.0028）=2.552中心定位儀器會自動對酶標(biāo)孔進(jìn)行中心定位，中心定位是要消除酶標(biāo)孔底的凸凹引起的厚薄不均帶來檢測的不準(zhǔn)確。在對每一個酶標(biāo)儀進(jìn)行檢測時，儀器其實要進(jìn)行35個點的測量，選取zui中間的5個點的均值為本孔的OD值。
    光源的參照通道
  參照通道是用來校準(zhǔn)由于電壓不穩(wěn)或燈泡磨損帶來的影響。
  用途和其它提示
  用于ELISA試劑的測定，廣泛用于各種實驗室，包括臨床實驗室。
  質(zhì)量控制
  質(zhì)量控制是試劑檢測的重要因素。請按照試劑說明書的要求進(jìn)行質(zhì)量控制。
  空白校正
  有一些試劑盒的說陰書將空白孔設(shè)置為空氣，其它大多數(shù)空白孔的設(shè)置是用試劑來設(shè)置的，請按照試劑盒的說明書要求進(jìn)行。
  檢測結(jié)果的解釋
  由于有相當(dāng)多的因素會影響檢測的結(jié)果，如不同的酶標(biāo)板，檢測試劑的體積，都會造成OD值的不同，因此，只有使用同一酶標(biāo)板反應(yīng)的試劑檢測結(jié)果才能比較和分析。對結(jié)果的臨床解釋請依照試劑盒的說明書進(jìn)行.
  酶標(biāo)儀結(jié)構(gòu)
  規(guī)格有40孔板，55孔板，96孔板等多種，不同的儀器選用不同規(guī)格的孔板，對其可進(jìn)行一孔一孔地檢測或一排一排地檢測.
酶標(biāo)儀所用的單色光既可通過相干濾光片來獲得，也可用分光光度計相同的單色器來得到.在使用濾光片作濾波裝置時與普通比色計一樣，濾光片即可放在微孔板的前面，也可放在微孔板的后面，聚光鏡，光欄后到達(dá)反射鏡，經(jīng)反射鏡作90°反射后垂直通過比色溶液,然后再經(jīng)濾光片送到光電管.
從酶標(biāo)儀工作框圖和光路圖上可看出，它和普通的光電比色計有以下幾點差異：
（l）盛裝待測比色液的容器不再使用比色皿，而是使用塑料微孔板.微孔板常用透明的聚乙烯材料制成，對抗原抗體有較強的吸附作用，故用它作為固相載體.
⑵由于盛樣本的塑料微孔板是多排多孔的，光線只能垂直穿過，因此酶標(biāo)儀的光束都是垂直通過待測溶液和微孔板的，光束既可是從上到下，也可以是從下到上穿過比色液.
⑶酶標(biāo)儀通常不僅用A，有時也使用光密度OD來表示吸光度.酶標(biāo)儀可分為單通道和多通道2種類型，單通道又有自動和手動2種之分.自動型的儀器有X,Y方向的機械驅(qū)動機構(gòu)，可將微孔板L的小孔一個個依次送入光束下面測試，手動型則靠手工移動微孔板來進(jìn)行測量.
在單通道酶標(biāo)儀的基礎(chǔ)上又發(fā)展了多通道酶標(biāo)儀，此類酶標(biāo)儀一般都是自動化型的.它沒有多個光束和多個光電檢測器，如 12個通道的儀器設(shè)有 12條光束或 12個光源，12個檢測器和12個放大器，在X方向的機械驅(qū)動裝置的作用下，樣品12個為一排被檢測.多通道酶標(biāo)儀的檢測速度快，但其結(jié)構(gòu)較復(fù)雜價格也較高.
酶標(biāo)儀用途
可廣泛應(yīng)用于低紫外區(qū)的DNA、RNA定量及純度分析（A260/A280）和蛋白定量（A280/BCA/Braflod/Lowery），酶活、酶動力學(xué)檢測，酶聯(lián)免疫測定（ELISAs），細(xì)胞增殖與毒性分析，細(xì)胞凋亡檢測（MTT），報告基因檢測及G蛋白偶聯(lián)受體分析（GPCR）等
   酶標(biāo)儀應(yīng)用范圍
分類 項目名稱 簡 稱
血液學(xué)檢驗 血小板相關(guān)抗體的檢驗 PAIgA、PAIgG、PAIgM
D-二聚體的測定 D-Dimer
血清纖維蛋白降解產(chǎn)物的測定 FDP
三碘甲腺原氨酸、四碘甲腺原氨酸測定 T3、T4
免疫學(xué)檢驗 C反應(yīng)蛋白的測定 CRP
免疫球蛋白的測定 IgD、IgE
循環(huán)免疫復(fù)合物的測定 CIC
類風(fēng)濕因子的測定 IgG、IgA、IgM類RF
抗甲狀腺球蛋白抗體、微粒體抗體的測定 TG、TM
腫癌免疫學(xué)檢測 甲胎蛋白的測定 AFP
癌胚抗原的測定 CEA
前列腺特異抗原的測定 PSA
胰癌、膽道癌、胃癌的測定CA19-9
卵巢癌的測定 CA125
乳腺癌的測定 CA15-3
宮頸鱗癌的測定 SCC
多發(fā)性骨髓癌的測定
甲狀腺癌的測定 hTG
傳染病免疫學(xué)檢驗 甲肝血清學(xué)的檢測 抗HAV-IgM乙肝血清學(xué)的檢測 兩對半
丙肝血清學(xué)的檢測 抗HAV-IgG、抗HCV-IgM
丁肝血清學(xué)的檢測 抗HDV-IgG、抗HDV-IgM
戊肝血清學(xué)的檢測 抗HEV-IgG
腎綜合征出血熱類抗體的檢測 HFRS-IgG
乙型腦炎病毒抗體的檢測 IgM
人類免疫缺陷病毒抗體（即艾滋病）的檢測 HⅣ β 2 M
優(yōu)生優(yōu)育功能檢測 弓形蟲（體）病毒的檢測 TOXO
風(fēng)疹病毒的檢測 RV
巨細(xì)胞病毒的檢測 CMV
單純皰病毒的檢測 抗HSV（Ⅰ、Ⅱ）
其 它 本儀器還可做基因檢驗及獸殘、農(nóng)殘檢驗項目等

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