一、原理
還原型抗壞血酸(AsA)可以把鐵離子還原成亞鐵離子,亞鐵離子與紅菲咯啉(4,7-二苯基-1,10-菲咯啉,BP)反應形成紅色螯合物。在534nm波長的吸收值與AsA含量正相關,故可用比色法測定。脫氧抗壞血酸(DAsA)可由二硫蘇糖醇(DTT)還原成AsA。測定AsA總量,從中減去還原型AsA,即為DAsA含量。
二、儀器與用具
離心機;分光光度計;研缽;試管。
三、試劑
5%三氯yi酸(TCA);20%TCA;無水乙醇溶液;0.4%磷酸-乙醇溶液;0.5%BP-乙醇溶液;0.03%FeCl3-乙醇溶液;0.6g/LDTT;Na2HPO4-NaOH溶液:以0.2mol/LNa2HPO4和1.2mol/LNaOH等量混合;60mmol/LDTT-乙醇。
四、方法
1.制作標準曲線配制濃度為2mg/L,4mg/L,6mg/L,8mg/L,10mg/L,12mg/L,14mg/L的AsA系列標準液。取各濃度標準液1.0ml于試管中,加入1.0ml5%TCA、1.0ml乙醇搖勻,再依次加入0.5ml0.4%H3PO4-乙醇、1.0ml0.5%BP-乙醇、0.5ml0.03%FeCl3-乙醇,總體積5.0ml。將溶液置于30℃下反應90min,然后測定A534。以AsA濃度為橫坐標,以A534為縱坐標繪制標準曲線,求出線性方程。
2.提取取植物葉片1.0g,按1∶5(W/V)加入5%TCA研磨,4000r/min離心10min,上清液供測定。
3.測定
(1)AsA測定取1.0ml樣品提取液于試管中,按上述相同的方法進行測定,并根據標準曲線計算AsA含量。
(2)DAsA測定向1.0ml樣品液中加入0.5ml60mmol/LDTT-乙醇溶液,用Na2HPO4-NaOH混合液,將溶液PH調至7~8,置于室溫下10min,使DAsA還原。然后加入0.5ml20%TCA,把PH調至1~2。按AsA相同方法進行測定,計算出總AsA含量,從中減去AsA,即得DAsA含量。上海友騰生物傾力為客戶提供上萬種科研試劑,提供*、zui全、zui有效的科研試劑產品,質量被全國各大院校科研機構認可。
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