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反轉錄試劑盒采用經優化的穩定的反轉錄預混體系5×RTMasterMix進行RNA的反轉錄反應,該預混體系包含點突變致RNaseH活性缺失的反轉錄酶M-MLVⅢ、dNTP、反應Buffer和RNaseInhibitor。該試劑盒采用的反轉錄酶為經進一步改良的M-MLVⅢ,可以極大限度地抑制RNA結構與反轉錄酶的非特異性結合,不僅保證了的cDNA合成效率和cDNA合成速度,同時也使得合成的cDNA本底低、純度高、完整性好。使用時只需加入模板、引物和RNaseFreeH2O即可,大大簡化了操作過程,提高了效率,減少了操作過程中的人為誤差,具有快速簡便、重復性高、特異性好、靈敏度高和穩定性好的特點。本試劑盒提供了進行RT-PCR所需要的全部試劑。使用本試劑盒擴增得到的目的產物3'端具有A尾,可以直接克隆于T載體中。
儲存:
請放置于-20°C,可保存兩年,請避免反復凍融
操作方法
1.按以下組分配制反轉錄反應液
TotalRNAorPoly(A)RNA0.2-2μg
5×RTMasterMix4μl
*Oligo(dT)20Primer1μl
RNaseFreeH2OUpto20μl
*注:反轉錄引物可根據需要改用隨機引物或
特異性引物。
2.在PCR儀上按以下條件進行反轉錄反應:
30°C5min
42°C30~60min
85°C5min
4°C
3.配置反應體系如下進行PCR擴增:
2×TaqPCRMix25μl
反轉錄產物1-5μl
上游引物(10μM)2μl
下游引物(10μM)2μl
滅菌雙蒸水Upto50μl
4.PCR擴增循環參數上海友騰生物傾力為客戶提供上萬種科研試劑,提供*、zui全、zui有效的科研試劑產品,質量被全國各大院校科研機構認可。咨詢!同時代理IBL,DRG ,R&D,HCB等品牌*試劑盒。
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