北京松信宏澤科技有限公司

：潘女士

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金剛烷胺ELISA試劑盒

1 概要

金剛烷胺是一類抗毒素，被認為對禽類流感有一定的預防抵抗作用，因而受到廣大養殖戶的青睞，目前美國已經確定其對于抗帕金森病藥物的有效性是不確定的，2005年，據報道中國的家禽養殖戶使用金剛烷胺作為禽流感的預防藥物，中國自那時起，明確禁止家禽中使用金剛烷胺。

目前普遍利用LC-UV、LC-MS、LC-MS/MS進行金剛烷胺的殘留檢測，相對于高成本的儀器分析，酶聯免疫分析法（ELISA）可提供經濟、簡單、低成本且大量初篩的檢測。本公司研發的金剛烷胺酶聯免疫快速檢測試劑盒，經衍生，萃取，ELISA分析即可完成檢測。本試劑盒可用于定性、定量檢測組織中金剛烷胺的殘留。

2 原理

本試劑盒采用直接競爭ELISA法檢測樣品中的殘留。在微孔板上預包被抗金剛烷胺抗體，酶標抗原與標準品及樣品中的抗原競爭結合微孔板中金剛烷胺抗體，洗滌后用H2O2-TMB底物系統顯色，樣品吸光度值與其所含金剛烷胺量成負相關，與標準曲線比較即可得出金剛烷胺含量。

3 試劑盒組份

每個試劑盒中的試劑可進行96個測量（包括標準測定），試劑盒組份：                                                                       

包被有金剛烷胺抗原微孔板------------------96孔（8孔/條×12條）

金剛烷胺標準品溶液-------------------------------------6瓶（1mL/瓶）

0號：0 μg/L；1號：0.5 μg/L；2號：1.5 μg/L；3號：4.5 μg/L；4號：13.5 μg/L；5號：27 μg/L

金剛烷胺HRP工作液---------------------------------------1瓶（6 mL）

金剛烷胺純化試劑---------------------------------------------------80 g

顯色液-------------------------------------------------------1瓶（12 mL）

終止液--------------------------------------------------------1瓶（7 mL）

20×濃縮洗滌液----------------------------------------------1瓶（30 mL）

10×濃縮復溶液----------------------------------------------1瓶（25 mL）

封板膜-------------------------------------------------------------------1張

說明書-------------------------------------------------------------------1份

4 另外所需儀器和試劑

4.1試劑

l 乙腈（分析純）

l 去離子水或蒸餾水

l 1×復溶液：將10×復溶液與去離子水（或蒸餾水）按體積比1:9混合均勻待用

4.2儀器

l 微孔板酶標儀（450 nm）

l 恒溫箱（37℃）

l 天平（精度0.01 g）

l 均質機

l 振蕩器

l 離心機和離心管

l 旋轉蒸發器或氮吹儀

l 可調式0.5 μL～20 μL， 20 μL～200 μL 和100 μL～1000 μL 微量移液器

l 多道移液器

金剛烷胺ELISA試劑盒

5 樣品處理

         組織方法（稀釋倍數為0.5倍）

l 取勻質的樣品3.0 g（組織肉類應確保樣本無明顯的塊狀的組織）于50 mL離心管中，加入6 mL乙腈和1 g金剛烷胺純化試劑，充分震蕩混勻3分鐘。

l 室溫下4000 rpm 離心10分鐘。

l 移取2 ml 乙腈上清液到離心管中，在60℃水浴氮氣下吹干。

l 加入0.5 mL1×復溶液，渦旋震蕩2分鐘。

l 取100 μL用于分析。

6 注意事項

如果超過兩周以上不使用試劑盒，請將金剛烷胺-HRP和金剛烷胺標準品放置-20℃冷凍保存。

l 標準品中含有高濃度的金剛烷胺，請小心使用，避免污染試劑盒以及檢測樣本。

l 嚴格按照說明書的相應說明來保存和使用試劑盒內的各種試劑。

l ELISA盡量保持在室溫環境下操作，以避免因溫度差異帶來的變異；同時避免在通風口和陽光直射下操作。

l 試劑盒試劑稀釋以及樣本提取確保使用蒸餾水或去離子水；有機溶劑在有效期內使用，各項指標應符合分析純標示。

l 確保樣本正確儲存(測試樣本在2~8℃下冷藏盡量不超過1天，其余分裝-20℃凍存)。

l 試劑使用之前應充分混勻，以保證試劑的使用濃度合理。

l 不要使用過期的試劑盒。

l 不同批次的酶標抗原和抗體微孔板不能混用。

l 使用之前，將樣本及所需試劑的溫度平衡至20～25°C，否則可能導致后面檢測吸光值偏低。試劑使用完后應立即放回2～8°C冷藏。若一段時間不用，請將產品放置于零度以下冷凍保存。

l 洗板后出現板孔干燥，會導致標準曲線線性不好，因此洗板拍干后應立即進行下一步操作。

l 反應終止液為2 M硫酸，應避免與皮膚和衣物接觸。

l 底物溶液如果變藍表示已經變質，不能使用。

l 零標準品的吸光值<0.6時，表示試劑盒已經變質，不能使用。

7 檢測步驟

l 1×洗滌液的配制：將20×洗滌液與去離子水（或蒸餾水）按照體積比1:19比例充分混合均勻待用

l 編號：將金剛烷胺標準品和待測樣品對應微孔按序編號，建議每個標準品和待測樣品均做重復孔。

l 加樣：每孔加入標品或樣品100 μL，加入50 μL HRP酶標抗原工作液，輕敲震蕩酶標板邊緣1分鐘。

l 溫育：用封板膜封板后室溫25℃避光反應30分鐘。

l 洗滌：小心揭開封板膜，用1×洗滌液每孔250 μL 洗滌微孔板，連續洗滌3次，每次間隔20 S，用吸水紙拍干。

l 顯色：每孔加入底物TMB溶液100μL輕輕振蕩混勻，用封板膜封板后室溫25℃避光反應15 min

測定：每孔加入終止液100 μL，輕輕振蕩混勻，加入終止液后5分鐘內測定450 nm處吸光度值。

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