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上海滬宇生物科技有限公司
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閱讀:328發布時間:2015-9-18
細胞有絲分裂,在某種程度上依賴于將紡錘體延伸以拉開染色體對的小細胞器。在它們執行這一重要任務及其他任務之前,這些微小的圓柱結構——在動物中被稱為中心粒,在酵母中被稱為紡錘體極體(SPBs)——必須進行自我復制。
然而,由于當前顯微鏡的限制,關于這個納米級過程的許多見解,仍然沒有得以揭示。光學方法不能解決低于某些波長極限的物體,而非光學方法,如電子顯微鏡只能研究無生命的細胞。
現在研究小組設計出一種新的光學技術————結構照明顯微鏡和單顆粒平均法相結合,來解決活酵母細胞中SPB復制的單個組件。在這個過程中,他們已經發現了許多曾被認為很老套的驚人事實。不僅如此,他們還在細胞成像領域開辟了新的可能性。
研究人員說:“使用SIM來研究SPB結構,*改變了我們可以問答的問題類型,因為樣本數量不再受限制, SIM很可能在活細胞中起作用。"
多年來,EM——使用一束電子來實現分子甚至原子級分辨率,已經成為研究SPBs理所當然的技術手段。然而,EM有它的重大限制,例如,它在活細胞中不起作用。
該研究小組選擇SIM作為一種光學替代品。SIM使用水平線的激光產生場,向一個樣本上投射一個干擾圖案。根據研究人員介紹,對這些模式進行分析,可使研究人員能夠有效地將分辨率翻倍。
就其所有優點來說,SIM還涉及篩選相當多的噪音。要處理這個問題,并且更好地定位研究中的物體——可以假定它們有不同的形狀和位置,該研究團隊轉向SPA。在這項技術中,研究人員將大量的圖像在三維空間中沿著參考點對齊,然后將它們分為一個個單一的特征圖像。結果得到一副關于“細胞內發生了什么"的更清晰、更可靠的圖片。
SPA-SIM技術構成了雙色結構照明顯微鏡方法的一部分,這種方法使用內源性表達的熒光蛋白的衍生物。通過基因技術,研究人員使目標蛋白質與2個標準的熒光蛋白相融合,它們將在酵母自然表達該基因的時候,呈現出來。
根據研究人員介紹,這項研究將SPA與SIM結合使用,是*篇關于雙色超分辨率SPA的論文。此外,其他的研究都集中在幾個蛋白質對,而目前的研究則描述了相當大一部分的大的、多蛋白質復合物。"
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