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BCA蛋白質定量試劑盒使用說明

閱讀:510發布時間:2017-3-23

BCA蛋白質定量試劑盒實驗原理:

堿性條件下,蛋白質分子中的肽鍵結構能與Cu2+結合生成紫色絡合物,同時將Cu2+還原為Cu+。BCA試劑可靈敏特異的與Cu+結合,形成穩定的有顏色的絡合物,562nm處有zui高的吸收值,可在540-595nm測定其吸收值,顏色的深淺與蛋白質濃度成正比,與標準曲線對比,即可計算待測蛋白的濃度。

BCA蛋白質定量試劑盒簡介:

對不同種類的蛋白質檢測的變異系數非常小,快速靈敏,穩定可靠,測定蛋白濃度不受絕大部分樣品中化學物質的影響,可以兼容樣品中高達5%的SDS,5%的Triton X-100,5%的Tween 20, 60, 80。而且在20-2000μg / mL濃度范圍內有較好的線性關系。

BCA蛋白質定量試劑盒使用說明:

1. 根據樣品數量,按50體積BCA試劑A加1體積BCA試劑B(50:1)配制適量BCA工作液,充分混勻。BCA工作液室溫下24小時內穩定。

2. *溶解蛋白標準品,取C液10微升稀釋至100微升,使終濃度為0.5mg/mL。原則上,蛋白樣品在什么溶液中,標準品應用什么溶液稀釋。但我們強烈建議使用三蒸水稀釋標準品及樣品。

3. 標準品的稀釋:標準曲線的濃度范圍應在20-2000μg / mL之間。建議使用倍比稀釋法;建議取4~6個不同的濃度做標準曲線;建議每個濃度做2~3個復孔。

4. 蛋白樣品的稀釋:將待測蛋白樣品稀釋到標準曲線所能檢測的范圍內。在eppendorf管中對待測蛋白進行稀釋,混勻。可用溶解蛋白的液體進行稀釋,但我們建議使用三蒸水稀釋標準品。

5. 在96孔板各孔中加入200μL BCA工作液,再在每孔中分別加入已稀釋好的標準品和蛋白樣品各20μL,建議標準品做2~3個復孔。37℃放置30分鐘。 

6. 測定A562nm處的吸光度值,540-595nm之間的波長也可接受。根據標準曲線計算出蛋白濃度。


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