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技術(shù)文章

細(xì)胞的凍存步驟

閱讀:499發(fā)布時間:2015-7-2

細(xì)胞低溫凍存是培養(yǎng)室常規(guī)工作和通用技術(shù)。下面我們就來介紹一下細(xì)胞凍存的步驟:1.選對數(shù)增生期細(xì)胞,在凍存前1d換液。 
2.按常規(guī)方法把培養(yǎng)細(xì)胞制備成懸液,計(jì)數(shù),使細(xì)胞密度達(dá)5×10 7 ml左右密度,離心,去上清。 
3.加入配制好的凍存液,按與去上清相同的量一滴一滴加入離心管中,然后用吸管輕輕吹打令細(xì)胞重懸。凍存細(xì)胞時培養(yǎng)液中加入保護(hù)劑10%二甲基亞砜或甘油,可使冰點(diǎn)降低,使細(xì)胞內(nèi)水分在凍結(jié)前透出細(xì)胞外。 
4.分裝于無菌凍存管中,每管加1.5m懸液。 
5.旋好凍存管并仔細(xì)檢查,一定要蓋緊,做好標(biāo)記。 
6.凍存:在特殊的 儀器 或簡易的液氮容器中,按-1min的速度,在3040min時間內(nèi),下降到液氮表面,再停30min后,直接投入液氮中。要適當(dāng)掌握下降冷凍速度,過快能影響細(xì)胞內(nèi)水分透出,太慢則促進(jìn)冰晶形成。 



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