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上海滬宇生物科技有限公司
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閱讀:524發布時間:2015-7-2
細胞低溫凍存是培養室常規工作和通用技術。下面我們就來介紹一下細胞凍存的步驟:1.選對數增生期細胞,在凍存前1d換液。
2.按常規方法把培養細胞制備成懸液,計數,使細胞密度達5×10 7 /ml左右密度,離心,去上清。
3.加入配制好的凍存液,按與去上清相同的量一滴一滴加入離心管中,然后用吸管輕輕吹打令細胞重懸。凍存細胞時培養液中加入保護劑10%二甲基亞砜或甘油,可使冰點降低,使細胞內水分在凍結前透出細胞外。
4.分裝于無菌凍存管中,每管加1.5m懸液。
5.旋好凍存管并仔細檢查,一定要蓋緊,做好標記。
6.凍存:在特殊的 儀器 或簡易的液氮容器中,按-1℃/min的速度,在30~40min時間內,下降到液氮表面,再停30min后,直接投入液氮中。要適當掌握下降冷凍速度,過快能影響細胞內水分透出,太慢則促進冰晶形成。
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