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Elisa試劑盒雙抗夾心法具體實驗步驟

閱讀：2034發布時間：2015-4-23

ELISA雙抗體夾心法的原理是將特異性抗體結合到固相載體上形成固相抗體，然后和待檢血清中的相應抗原結合形成免疫復合物，洗滌后再加酶標記抗體，與免疫復合物中抗原結合形成酶標抗體-抗原-固相抗體復合物，加底物顯色，判斷抗原含量。下面我們就來看一下elisa試劑盒雙抗夾心法的具體實驗步驟：

首先*步是包被，用0.05MPH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質含量為1～10μg/ml。在每個聚苯乙烯板的反應孔中加0.1ml，4℃ 過夜。第二天，丟棄孔中的溶液，用洗滌緩沖液洗3次，每次洗滌3分鐘。

第二步是加樣，加一定稀釋的待檢樣品0.1ml到已包被的反應孔中，置于37℃ 的溫度下孵育1小時。孵育完之后洗滌。

洗滌完之后需要做的是加酶標抗體在各個反應孔中，加入新鮮稀釋的酶標抗體0.1ml。37℃ 孵育0.5～1小時，洗滌。

做完上個步驟，下面我們需要做的就是加底物液顯色，在各個反應孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃ 10～30分鐘。

實驗即將完成即終止反應，于各反應孔中加入2M硫酸0.05ml。

實驗的zui后一步即實驗結果的判定，可在白色背景上，直接用肉眼觀察結果：反應孔內顏色越深，陽性程度越強，陰性反應為無色或極淺，依據所呈顏色的深淺，以“+"、“-"號表示。也可測OD值：在ELISA檢測儀上，于450nm處，以空白對照孔調零后測各孔OD值，若大于規定的陰性對照OD值的2.1倍，即為陽性。

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