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上海滬宇生物科技有限公司

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技術文章

閱讀：494發布時間：2015-4-20

血小板衍生生長因子是貯存于血小板α顆粒中的一種堿性蛋白質。是低分子量促細胞分裂素。

1．AG1523細胞生長在含10％小牛血清的MEM培養液中。檢測前用0.25％*消化生長到匯合的細胞。每個35mm培養皿加入2ml含3×104細胞的細胞培養液，在37℃ 5％ CO2飽和水汽二氧化碳培養箱中培養4天。洗去培養液，加2ml無血清的MCDB105培養液。繼續培養2天。

2．第6天時每個培養皿中約含有105細胞，洗去培養液。加入系列稀釋的待測樣品、0.1mg/ml人血清白蛋白、0.02μCi [3H]脫氧胸苷和無血清的MCDB105培養液，總量1ml。繼續培養48小時。

3．吸去培養液，用3～4ml 5％三氯醋酸溶液固定細胞10分鐘。吸去三氯醋酸溶液，用自來水輕輕洗去固定液，室溫中自然干燥。

4．每個培養皿加入0.5ml含1％ SDS的0.3mol/L NaOH溶液，室溫中溶液細胞15分鐘。將溶解物轉移到液體閃爍計數管中，加5ml閃爍液，在液體閃爍計數儀上計數放射性活性。約3ng/mlPDGF即能誘導50％zui大[3H]脫氧胸苷攝入。

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