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小鼠骨髓嗜多染紅細(xì)胞微核的測定方法

閱讀：705發(fā)布時(shí)間：2015-2-26

小鼠骨髓嗜多染紅細(xì)胞微核的測定方法實(shí)驗(yàn)方法與步驟:

（1）*處理：取骨髓前24h先給小鼠腹腔注入*，注射劑量為100mg／kg動(dòng)物體重。

（2）取骨髓：用損傷脊髓法處死小鼠，然后用剪刀剪開大腿上的皮膚和肌肉，取出大腿骨，用一小塊紗布來回搓干凈附在骨上的肌肉碎渣。剪掉股骨兩端膨大的關(guān)節(jié)頭，然后用注射器吸取5ml生理鹽水，插入股骨一端，將骨髓細(xì)胞沖洗至10ml的離心管中。可重復(fù)沖洗多次，直至骨髓腔呈白色為止。

（3）離心處理：將所獲得的細(xì)胞懸浮液以 1000rpm離心10min，吸去上清液，在沉淀物中加入2滴滅活的小牛血清，制成細(xì)胞懸液。

（4）涂片：滴一滴懸液于載玻片一端，按常規(guī)方法涂片，在空氣中晾干。

（5）固定：將晾干的載玻片放入甲醇固定液中10min，取出晾干。

（6）染色：將制片平放在玻璃板上，用1∶9∶10的 Giemsa∶PBS∶瑞氏染液，染色15min，流水沖洗后晾干即可鏡檢。

（7）觀察：嗜多染紅細(xì)胞為年幼紅細(xì)胞，呈灰藍(lán)色，略大于紅細(xì)胞（紅色），微核多呈圓形和橢圓形，呈藍(lán)紫色或紫紅色。

（8）結(jié)果分析：在顯微鏡下，每只小鼠骨髓涂片標(biāo)本計(jì)數(shù)1000~2000個(gè)嗜多染紅細(xì)胞，包括其中出現(xiàn)微核的細(xì)胞數(shù)，將結(jié)果填入表內(nèi)，并計(jì)算微核細(xì)胞率，觀察記錄結(jié)果。

按100mg/kg體重劑量給小鼠腹腔注射*，其嗜多染紅細(xì)胞微核率為（48.9±3.6）％。正常小鼠嗜多染紅細(xì)胞微核率為5‰以下，超過5‰為異常。

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