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技術(shù)文章

半貼壁細(xì)胞的傳代技術(shù)

閱讀：6136發(fā)布時(shí)間：2017-9-25

貼壁細(xì)胞（adherent cells）這類(lèi)細(xì)胞的生長(zhǎng)必須有可以貼附的支持物表面，細(xì)胞依靠自身分泌的或培養(yǎng)基中提供的貼附因子才能在該表面上生長(zhǎng)，繁殖。當(dāng)細(xì)胞在該表面生長(zhǎng)后，一般形成兩種形態(tài)，即成纖維樣細(xì)胞性或上皮樣細(xì)胞。

貼壁細(xì)胞傳代時(shí)通常采用以下方法：

1.選用細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)好（90－95％），生長(zhǎng)數(shù)量大于5×105 的細(xì)胞進(jìn)行傳代。

2.用移液槍充分吹打培養(yǎng)皿壁，使半貼壁細(xì)胞脫落下來(lái)（如果細(xì)胞貼壁比較牢，可使用*進(jìn)行消化1-3min,用1~2滴血清終止消化）。

（注：消化液配比為：0.25％*＋0.02％EDTA。若貼壁細(xì)胞逐漸趨于圓形、部分懸浮后，即可用手指輕輕拍打細(xì)胞,培養(yǎng)瓶側(cè)部或底部使大部分貼壁細(xì)胞脫落，之后立即加入細(xì)胞終止液，終止細(xì)胞消化。每種細(xì)胞的消化時(shí)間有差異，消化時(shí)注意觀察，不要消化太久。）

3.將混勻后懸液吸至15ml離心管中，1000rpm*3min離心，去原培養(yǎng)基。

4.棄離心管中上清液，加入細(xì)胞培養(yǎng)液重懸細(xì)胞。細(xì)胞計(jì)數(shù)調(diào)整至5×105/ml。

5.細(xì)胞分瓶后，加入適量細(xì)胞培養(yǎng)液至細(xì)胞培養(yǎng)瓶中，置于5%CO2、95%空氣、37oC培養(yǎng)箱靜置培養(yǎng)24小時(shí)。


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