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科興技術梳理細胞的所有冷凍方法

閱讀:334發布時間:2016-1-4

    細胞凍存是細胞保存的主要方法之一。利用凍存技術將細胞置于-196℃液氮中低溫保存,可以使細胞暫時脫離生長狀態而將其細胞特性保存起來,這樣在需要的時候再復蘇細胞用于實驗。而且適度地保存一定量的細胞,可以防止因正在培養的細胞被污染或其他意外事件而使細胞丟種,起到了細胞保種的作用。除此之外,還可以利用細胞凍存的形式來購買、寄贈、交換和運送某些細胞。 細胞凍存時向培養基中加入保護劑--終濃度5%.15%的甘油或二甲基亞砜(DMSO),可使溶液冰點降低,加之在緩慢凍結條件下,細胞內水分透出,減少了冰晶形成,從而避免細胞損傷。 采用"慢凍快融"的方法能較好地保證細胞存活。標準冷凍速度開始為-1 到 -2℃/min,當溫度低于-25℃時可加速,到-80℃之后可直接投入液氮內(-196℃)。

細胞冷凍方法:

1.4℃以下慢慢地冷凍,保存于液態氮中(-196℃)。

2.37℃快速解凍。

3.保護劑(抗凍劑):添加甘油 (glycerol) ( I0 %左右 ) 或dimethy1sulfoxide (DMSO) ( 5- 10% ) 。

4.有些細胞如果采用上述的方法時,無法得到高的存活率。此時,則必需考慮可能傷害細胞的機制,添加劑之作用等而來找出適當的條件來修正。

    備注:經過冷凍保存后的細胞,其生存率會下降,冷凍時之冷卻速度,保存溫度,解凍時升高溫度的速度以及添加之冷凍保存液之種類、濃度等都可影響細胞存活率。

 


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