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閱讀:360發(fā)布時(shí)間:2015-12-28
gelred一種高靈敏、低毒性和超穩(wěn)定于一身的的熒光核酸凝膠染色試劑。具有廣泛適應(yīng)性和染色過(guò)程簡(jiǎn)單等特點(diǎn)。下面簡(jiǎn)單介紹gelred使用方法
1.膠染法(用法同EB)
(1)制膠時(shí)加入GelRed 核酸染料(例如:每50mL 瓊脂糖溶液中加入5μL GelRed 10,000× 儲(chǔ)液,以此比例類(lèi)推)。
(2)按照常規(guī)方法進(jìn)行電泳。
注意事項(xiàng):
此方法染色染料用量相對(duì)較少。500 μL染料大約可以做100塊50mL的膠。
由于GelRed具有良好的熱穩(wěn)定性,可以在熱的瓊脂糖溶液中直接添加,而不需要等待溶液冷卻。搖晃,振蕩或者翻轉(zhuǎn)以保證染料充分混勻。也可以選擇將GelRed儲(chǔ)液加到瓊脂糖粉末和電泳緩沖液中,然后用微波爐或其他常用方式加熱以制備瓊脂糖凝膠。GelRed兼容所有常用的電泳緩沖溶液。
含有染料的預(yù)制凝膠溶液可以大量制備,并長(zhǎng)期保存直到使用。
此方法不適合預(yù)制聚丙烯酰胺凝膠,對(duì)于聚丙烯酰胺凝膠請(qǐng)使用泡染法。
2.泡染法
(1)按照常規(guī)方法進(jìn)行電泳。
(2)用H2O將GelRed 10,000× 儲(chǔ)液稀釋約3,300倍到0.1M NaCl中,制成3× 染色液。(例如將15μL GelRed 10,000× 儲(chǔ)液和5mL 1M NaCl加到45mL H2O中)。
(3)將凝膠小心地放入合適的容器中,如聚丙烯容器中。緩慢加入足量的3× 染色液浸沒(méi)凝膠。室溫振蕩染色30min左右,zui*染色時(shí)間根據(jù)凝膠厚度以及瓊脂糖濃度不同而略有不同。對(duì)于含3.5~10%丙烯酰胺的凝膠,染色時(shí)間通常介于30min到1h,并隨丙烯酰胺含量增加而延長(zhǎng)。
注意事項(xiàng):
1. 用泡染法染色時(shí),染料用量較多。單次使用的染色液可重復(fù)使用3次左右。
2. 3× GelRed染色液可以大量制備,在室溫下避光保存直至用完。
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