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閱讀：319發布時間：2015-8-27

1.正式試驗時，應分別以陽性對照與陰性對照控制試驗條件，待檢樣品應作一式二份，以保證實驗結果的準確性。

2.在ELISA中，進行各項實驗條件的選擇是很重要的，其中包括:

(1)固相載體的選擇：目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何種載體，在使用前均可進行篩選：用等量抗原包被，在同一實驗條件下進行反應，觀察其顯色反應是否均一性，據此判明其吸附性能是否良好。

（2）包被抗體的選擇：將抗體吸附在固相載體表面時，要求純度要好,吸附時一般要求PH在9.0～9.6之間。吸附溫度，時間及其蛋白量也有一定影響,一般多采用4℃ 18～24小時。

(3)酶標記抗體工作濃度的選擇：首先用直接ELISA法進行初步效價的滴定。然后再固定其它條件或采取“方陣法"在正式實驗系統里準確地滴定其工作濃度。

(4)酶的底物及供氫體的選擇：對供氫體的選擇要求是價廉、安全、有明顯地顯色反應，而本身無色。有些供氫體有潛在的致癌作用，應注意防護。底物作用一段時間后，應加入強酸或強堿以終止反應。通常底物作用時間，以10-30分鐘為宜。底物使用液必須新鮮配制，尤其是H₂O₂在臨用前加入。

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