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雙抗夾心ELISa的步驟

閱讀:324發布時間:2015-1-8


原理:

1)單抗包被-抗原-酶標二抗-底物顯色。
本法首先也是用特異性抗體包被于固相載體,經洗滌后加入含有抗原之待測樣品,如待檢樣品中有相應抗原存在,即可與包被于固相載體上的特異性抗體結合,經保溫孵育洗滌后,即可加入酶標記特異性抗體,再經孵育洗滌后,加底物顯色進行測定,底物降解的量即為欲測抗原的量。
    2)單抗包被-抗原-二抗-酶標二抗-底物顯色。(改良雙抗體夾心法)
本法首先是將特異性抗體a包被于固相載體,經洗滌加入含有欲測抗原之待檢樣品。經孵育洗滌后再加一次未標記的特異性抗體b,而這次加入的抗體b于*次包被于固相載體上的特異性抗體a對被測抗原來說都是特異性的,但不是用同種動物免疫制備的,否則可出現非特異性反應。經孵育洗滌后,再加酶標記抗b抗體,再經孵育洗滌后加底物顯色進行測定。這種方法與雙抗體夾心法不同之處是多加了一層抗體。

因此,放大的倍數更高,故比雙抗體夾心法更加靈敏。同時避免標記特異性抗體,而另一優點是只要標記一種抗抗體,即可達到多種應用。



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