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閱讀:1691發布時間:2014-12-15
ELISA自己包被抗體—封閉—加樣—二抗—HRP—TMB顯色,上述步驟應該是對的,為什么所有孔都*沒顏色.
做了6次了,怎么知道是哪一步出問題了,全是陰性?你的試驗想檢測什么?檢測抗原?檢測抗體?你這個實驗思路問題很大。
你自己先固定抗體,加樣,是不是加抗原?再加二抗,請問,加不加這個樣,也就是加不加這個抗原,影響實驗結果嗎?酶標二抗是和抗體結合的。還有你的二抗和一抗之間中間隔了個抗原,二抗還能和抗體結合嗎?
是想檢測抗原的,固定的一抗可以和抗原反應,同時也能和酶標二抗反應,不存在有東西隔在中間的情況。這個實驗思路是標準的啊,教科書上都是這么做的。
你這個實驗是不是,出現陰性結果,就是樣品是陽性?
我解釋一下,你實驗出現的問題: 固定一抗,直接加酶標二抗,二抗結合上去,酶也結合上去,沖洗,去掉未結合的酶標二抗,加顯色劑,陽性。 固定一抗,加抗原反應。加酶標二抗,如果抗原不影響酶標二抗和抗體結合的話,酶標二抗和一抗結合,沖洗未結合的二抗,加顯色劑,陽性。
那么,請問,加不加抗原,結果有什么不同?只有你的方法的結果是陰性的,才有說服力,不過靠陰性反應來確定抗原是不是存在,有點不靠譜。
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