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簡析液相色譜操作規程

閱讀:434發布時間:2013-8-20

液相色譜操作規程
一. 開機
按以下次序打開色譜儀各部分電源。
泵――檢測器――計算機主機――顯示器――打印機
二. 打開色譜工作站軟件
用鼠標雙擊“色譜工作站”圖標,然后輸入密碼“SAGE”,選OK。然后選“Alltech-426”圖標。
三. 設定色譜分析條件
1. 設定色譜泵流量
按箭頭輸入所需的流速,按RUN/STOP鍵開始運行。
2. 設定檢測器條件
檢測器自檢通過后,調整到檢測所需波長數。按ZREO鍵回零
四. 準備分析
1. 配置流動相,按體積比配置所需的流動相。混合均勻,過濾、在*中超聲20分鐘。
2. 將過濾頭放入流動相中,打開泵上的旁通閥,按PURG鍵,沖洗并用注射器抽取一定量的流動相,直到塑料管中無氣泡為止。再按一下則停止。
3. 按“RUN/STOP”鍵,開泵。

五. 進樣分析
1. 在計算機上,選擇藍色的“RUN/SINGLE”圖標,在數據文件名的左側,將chrom\后的文件名改為你設定的名稱,如SAM01.001,然后選擇OK。將進樣閥扳到LOAD位置,用微量注射器抽取所需量微升的樣品,注入到進樣閥中,按檢測器的調零鍵“ZERO”,然后將進樣閥扳到INJECT位置,敲鍵盤上的空格鍵這時,色譜系統開始工作。
2. 色譜圖采集完畢,系統自動停止計時。此時選擇“Analyze”圖標,對譜圖進行計算,然后選擇“Reports”圖標,選擇“面積%”,即可在屏幕上觀察分析結果。如需將分析結果打印出來,選擇打印機圖標,選擇“打印報告P”――選擇“定制C”,打印機即開始打印分析結果。
3. 分析下一個樣品,重復1步和2步。每個樣品之間間隔5分鐘左右。
六. 關機
關機前,用流動相沖洗色譜柱20-30分鐘,如色譜柱長期不用,再用純乙腈沖洗20-30分鐘,然后,先關閉計算機軟件,按以下次序切斷各部分電源:計算機主機――顯示器――泵――檢測器
注意事項:1. 計算機一定要先退出操作軟件后,才能切斷電源。
2. 色譜泵流量一般情況下不能超過1.5ml/min。
3. 當流動相用完后,泵不能啟動。
操作規程附錄
當需要修改分析條件時,可按以下步驟操作:
一. 修改運行時間:
選擇“Setup”圖標,將采樣頻率設定為2,運行時間設為實際色譜分析時間,如10或20分鐘,通道狀態選為ON,觸發選為第二項。選OK,然后選擇“文件”――“保存方法S”
二. 修改積分參數
當計算結果不正常時,需要修改積分參數:
選擇“方法”――“積分參數表I”――將Minimun Area(zui小峰面積)增加或減少,目的是不計算小的雜質峰,將“Width”(峰寬)增加或減少,平頭峰一般設 2.2左右,正常的尖峰一般設為0.5左右。“Threshold”(峰靈敏度)一般設為150。然后選擇“Analyze”重新計算。
如結果仍不滿意,重復以上步驟,直到結果滿意為止。
選擇“文件”――“保存方法”。

三. 修改報告格式
選擇“方法”――“定制報告”――用鼠標聯擊*個方框,選擇File Name, User Name, Acu. Time & Date, Print Time & Date, 在方框中輸入注釋。

用鼠標連擊第二個方框,Scaling 左側選為Autoscale To Largest Peak 
用鼠標連擊Options 后的Annotation 下的Retention Time

用鼠標連擊第三個方框,選擇Unnamed Peaks 和Totals, Format
在Title下,在與左側響應的位置敲入Peak Number, Retention Time ,Area, Area% 在Column, Width, Format 下輸入響應的數字。

注:Column 為坐標。
Width 為寬度,一般為10或14。
Format 為小數點后的位數,一般為2或3。

四. 調閱以前的圖譜或方法
用鼠標選擇Method 圖標,然后選擇你所需要的方法,選OK即可。用鼠標選擇Data圖標,然后選擇你所需要的圖譜,選OK即可。

內標法

1. 用鼠標單擊METHOD 圖標,選擇方法,單擊OK。
2. 用鼠標單擊藍色的RUN/SINGLE圖標,修改數據名稱為標樣1.DAT, 或別的名稱,進一針標樣。
3. 標樣譜圖記錄完畢,用鼠標單擊ANALYZE圖標,對譜圖計算。然后鼠標單擊任務欄上的方法菜單,選擇圖形參數設置,鼠標右移選擇確認峰,然后用鼠標在*個峰的前面點一下,在zui后一個峰的后面點一下,然后選擇替代。
4. 在譜峰表內的ISTD ID#下的*行,輸入內標物的出峰順序號(1或2),在LEVEL 1下的*行輸入標樣的濃度,在第二行輸入內標物的濃度。
5. 然后用鼠標單擊任務欄上的方法菜單,選擇校正設置,在校正設置對話欄內,第三行選擇面積,第四行選擇AVERAGE RF, 第五行輸入NONE,第六行不選,第七行輸入平均,第八行選擇0,第九行選NONE,第十行為0,第十一行不選,第十二行為內標量輸入1,第十三行輸入1,第十四行輸入1。
6. 然后用鼠標單擊RECALIB圖標,選擇校正,選擇是。
7. 然后用鼠標單擊任務欄上的方法菜單,選擇顯示校正曲線,記錄校正因子RF。
8. 選擇Run Calib 圖標,修改方法名,再進標樣,譜圖記錄完畢,然后用鼠標單擊任務欄上的方法菜單,選擇顯示校正曲線,記錄校正因子RF,計算標準偏差,如果小于0.3%,則用鼠標單擊藍色的RUN/SIGLE鍵,進樣品,然后選擇打印圖標打印出結果。
9. 打印出的濃度即為內標濃度。

外標法

1. 用鼠標單擊METHOD 圖標,選擇所需方法,單擊OK。
2. 用鼠標單擊藍色的RUN/SINGLE圖標,修改數據名稱為標樣1.DAT, 或別的名稱,進一針標樣。
3. 標樣譜圖記錄完畢,用鼠標單擊ANALYZE圖標,對譜圖計算。然后鼠標單擊任務欄上的方法菜單,選擇圖形參數設置,鼠標右移選擇確認峰,然后用鼠標在標準品峰的前面點一下,后面點一下,然后選擇替代。
4. 在譜峰表內的LEVEL 1下的*行輸入標樣的濃度。如果標樣有多個濃度則在LEVEL* 下的*行輸入第*個標樣的濃度。
5. 然后用鼠標單擊任務欄上的方法菜單,選擇校正設置,在校正設置對話欄內,第三行選擇面積,第四行選擇AVERAGE RF, 第五行輸入NONE,第六行不選,第七行輸入平均,第八行選擇0,第九行選NONE,第十行為0,第十一行不選,第十二行為內標量輸入0,第十三行輸入1,第十四行輸入1。
6. 然后用鼠標單擊RECALIB圖標,選擇校正,選擇是。
7. 然后用鼠標單擊任務欄上的方法菜單,選擇顯示校正曲線,記錄校正因子RF。
8. 選擇Run Calib 圖標,修改方法名,再進標樣,譜圖記錄完畢,然后用鼠標單擊任務欄上的方法菜單,選擇顯示校正曲線,記錄校正因子RF,計算標準偏差,如果小于0.3%,則用鼠標單擊藍色的RUN/SIGLE鍵,進樣品,在樣品量出處輸入樣品量(如:取2ml樣品稀釋到50ml,則樣品量應為50/2/1000000*100%=0.0025)然后選擇打印圖標打印出結果。
9. 打印出的濃度即為外標含量。

 

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