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兔角膜后基質(zhì)層成纖維細胞,RCBBF細胞

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更新時間:2017-05-10 00:48:15瀏覽次數(shù):232次

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兔角膜后基質(zhì)層成纖維細胞,RCBBF細胞
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兔角膜后基質(zhì)層成纖維細胞,RCBBF細胞

細胞傳代的一般方法
開始兔角膜后基質(zhì)層成纖維細胞,RCBBF細胞傳代前,仔細檢查細胞傳代所需的儀器和試劑是否齊全:一般主要有:細胞(單層細胞,鏡檢適合)、培養(yǎng)液(MEM-0.2%LH培養(yǎng)液或MEM培養(yǎng)液或199等適合細胞有要求的培養(yǎng)液)、滅活小牛血清、*溶液(1萬單位)、7.5NaHC03溶液、0.25%*、PBS洗液。
用具:小方瓶(100m1)、克氏瓶、膠塞、吸管(10ml1m1)、細胞吹打管(20 ml(以上用具需經(jīng)121至少15分鐘高壓滅菌)
C02孵箱、超凈臺、倒置顯微鏡、4、—20冰箱
操作步驟:鏡檢,挑選生長狀態(tài)良好,細胞界限清晰,具有立體感,形態(tài)好無污染、無異常及可疑病變細胞。配制細胞培養(yǎng)液:按以下配比配制MEM-0.2%LH培養(yǎng)液100ml內(nèi),加入滅活小牛血清10m1,*溶液0.3m17.5%*溶液3ml。(僅供一般參考)。消化細胞;先用PBS洗液沖洗細胞表面1-2次,每次10m1,棄去洗液,向細胞瓶內(nèi)加入0.25%*溶液,每瓶1m1,細胞瓶平放,使消化液*覆蓋細胞表面。至細胞*脫落到*中。每瓶加入10m1細胞培養(yǎng)液吹打分散細胞,按所需的傳代比例分裝于小方瓶(100m1)中,再加入10m1細胞培養(yǎng)液重復吹打一次后分裝,然后補加至所需培養(yǎng)量。加塞,置于37±1孵箱培養(yǎng)。約24天成片。

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