小鼠組織蛋白去乙酰化酶(HD)ELISA試劑盒其他指標:C127(乳腺腫瘤) 血管內皮生長因子D(VEGF-D) 磷酸肌醇3激酶(PI3K)
MFC(胃癌) 血管內皮生長因子C(VEGF-C) 蛋白激酶B(PKB)
B16(黑色素瘤) 血管內皮生長因子D(VEGF-D) 血紅素氧合酶2(HO-2)
B16(黑色素瘤) 血管內皮生長因子C(VEGF-C) 丙酮酸激酶M2型同工酶(M2-PK)
P815(肥大瘤) 血管內皮生長因子B(VEGF-B) 甲狀腺過氧化物酶(TPO)
S-180(腹水瘤) 血管內皮生長因子(VEGF) αL巖藻糖苷酶(AFU)
RM-1(前列腺癌) 血管內皮粘附分子1(VCAM-1/CD106) 內皮型一氧化氮合成酶(eNOS)
SAC-IIC3(腹水瘤) 可溶性腫瘤壞死因子相關凋亡誘導配體(sTRAIL) 血紅素氧合酶1(HO-1)
NG108-15 [ 108CC15 ](小鼠神經瘤與大鼠神經膠質瘤之融合) 腫瘤壞死因子相關凋亡誘導配體4(TRAIL-R4) 誘導型一氧化氮合成酶(iNOS)
SAC-IIB2(腹水瘤) 腫瘤壞死因子相關凋亡誘導配體3(TRAIL-R3) 磷脂酶A2(PL-A2)
小鼠組織蛋白去乙酰化酶(HD)ELISA試劑盒 操作步驟
方法一 雙抗體夾心法
1. 包被:用0.05MPH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質含量為1~10μg/ml。在每個聚苯乙烯板的反應孔中加0.1ml,4℃ 過夜。次日,棄去孔內溶液,用洗滌緩沖液洗3次,每次3分鐘。(簡稱洗滌,下同)。
2. 加樣:加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應孔中,置37℃ 孵育1小時。然后洗滌。(同時做空白孔,陰性對照孔及陽性對照孔)。
3. 加酶標抗體:于各反應孔中,加入新鮮稀釋的酶標抗體(經滴定后的稀釋度)0.1ml。37℃ 孵育0.5~1小時,洗滌。
4. 加底物液顯色:于各反應孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃ 10~30分鐘。
5. 終止反應:于各反應孔中加入2M硫酸0.05ml。
6. 結果判定:可于白色背景上,直接用肉眼觀察結果:反應孔內顏色越深,陽性程度越強,陰性反應為無色或極淺,依據所呈顏色的深淺,以“+”、“-”號表示。也可測OD值:在ELISA檢測儀上,于450nm(若以ABTS顯色,則410nm)處,以空白對照孔調零后測各孔OD值,若大于規定的陰性對照OD值的2.1倍,即為陽性。
方法二 間接法
1.用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1~10μg/ml,每孔加0.1ml,4℃過夜;
2.次日洗滌3次;
3.加一定稀釋的待檢樣品(未知抗體)0.1ml于上述已包被之反應孔中,置37℃孵育1小時,洗滌;
4.(同時做空白、陰性及陽性孔對照)于反應孔中,加入新鮮稀釋的酶標第二抗體(抗抗體)0.1ml;
5.37℃孵育30-60分鐘,洗滌;
6.’zui后一遍用DDW洗滌。
其余步驟同“雙抗體夾心法”的4、5、6。
試劑器材
試劑
(1) 包被緩沖液(PH9.60.05M碳酸鹽緩沖液):
Na2CO3 1.59克
NaHCO3 2.93克
加蒸餾水至1000ml
(2) 洗滌緩沖液(PH7.4PBS):0.15M
KH2PO4 0.2克
Na2HPO4·12H2O 2.9克
NaCl 8.0克
KCl 0.2克
Tween-20 0.05% 0.5ml
加蒸餾水至1000ml
(3) 稀釋液:
牛血清白蛋白(BSA) 0.1克
加洗滌緩沖液至100ml
或以羊血清、兔血清等血清與洗滌液配成5~10%使用。
(4) 終止液(2M H2SO4):
蒸餾水178.3ml,逐滴加入濃硫酸(98%)21.7ml。
(5) 底物緩沖液(PH5.0磷酸棗檸檬酸):
0.2MNa2HPO4(28.4克/L)25.7ml
0.1M檸檬酸(19.2克/L) 24.3ml
加蒸餾水50ml。
(6) TMB(四甲基聯苯胺)使用液:
TMB(10mg/5ml無水乙醇)0.5ml
底物緩沖液(PH5.5) 10ml
0.75%H2O2 32μl
(7) ABTS使用液:
ABTS 0.5mg
Elisa試驗是一種敏感性高,特異性強,重復性好的實驗診斷方法。由于其試劑穩定、易保存,操作簡便,結果判斷較客觀等因素,已廣泛應用在免疫學檢驗的各領域中。ELISA檢測試劑盒是用于體外定性檢測人血清或血漿中的抗人類戊型肝炎(HEV)病毒 IgM 抗體ELISA檢測。