小鼠乳鐵傳遞蛋白/乳鐵蛋白（LF/LTF）ELISA試劑盒基因工程試劑對(duì)免疫測(cè)定技術(shù)發(fā)展的影響
     免疫測(cè)定技術(shù)的基礎(chǔ)在于抗原抗體之間的特異結(jié)合反應(yīng)，所以任何優(yōu)質(zhì)的診斷試劑離不開(kāi)優(yōu)質(zhì)的原料，如抗原抗體，酶等。以前用于免疫測(cè)定的抗原通常為各種純化抗原，而抗體則為純化抗原免疫動(dòng)物后獲得的多克隆抗體和使用雜交瘤技術(shù)得到的單克隆抗體，而抗原或抗體的標(biāo)記物如酶標(biāo)結(jié)合物則通過(guò)各種化學(xué)合成方法制備。近年來(lái)，隨著分子生物學(xué)的發(fā)展，使用基因工程方法制備各種特殊的抗原或抗體及其酶結(jié)合物等免疫測(cè)定試劑幾成為現(xiàn)實(shí)的新一代試劑，各種新型使用的測(cè)定方法也不斷出現(xiàn)。
小鼠乳鐵傳遞蛋白/乳鐵蛋白（LF/LTF）ELISA試劑盒HBsAg試劑特點(diǎn)（檢測(cè)模式：臨床抗體夾心法）：包被抗體為山羊多抗。多抗具有高親和性和對(duì)抗原各種表位的反應(yīng)性。酶表抗體為與HBsAg有不同結(jié)合位點(diǎn)的鼠復(fù)合單位，可測(cè)得HBsAg變異樣品，提高檢測(cè)的特異性（99.98%）提高檢測(cè)的靈敏度，應(yīng)用Parl Ehrich 學(xué)說(shuō)（PEI）HBsAg標(biāo)準(zhǔn)品，對(duì)ad標(biāo)準(zhǔn)品的靈敏度為0.05ng/ml對(duì)ay標(biāo)準(zhǔn)品靈敏度為0.025ng/ml
方法一　雙抗體夾心法
　　1.　包被：用0.05MPH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質(zhì)含量為1～10μg/ml。在每個(gè)聚苯乙烯板的反應(yīng)孔中加0.1ml，4℃ 過(guò)夜。次日，棄去孔內(nèi)溶液，用洗滌緩沖液洗3次，每次3分鐘。（簡(jiǎn)稱洗滌，下同）。
　　　2.　加樣：加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中，置37℃ 孵育1小時(shí)。然后洗滌。（同時(shí)做空白孔，陰性對(duì)照孔及陽(yáng)性對(duì)照孔）。
　　　3.　加酶標(biāo)抗體：于各反應(yīng)孔中，加入新鮮稀釋的酶標(biāo)抗體（經(jīng)滴定后的稀釋度）0.1ml。37℃ 孵育0.5～1小時(shí)，洗滌。
　　　4.　加底物液顯色：于各反應(yīng)孔中加入臨時(shí)配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃ 10～30分鐘。
　　　5.　終止反應(yīng)：于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml。
　　　6.　結(jié)果判定：可于白色背景上，直接用肉眼觀察結(jié)果：反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深，陽(yáng)性程度越強(qiáng)，陰性反應(yīng)為無(wú)色或極淺，依據(jù)所呈顏色的深淺，以“+”、“-”號(hào)表示。也可測(cè)OD值：在ELISA檢測(cè)儀上，于450nm（若以ABTS顯色，則410nm）處，以空白對(duì)照孔調(diào)零后測(cè)各孔OD值，若大于規(guī)定的陰性對(duì)照OD值的2.1倍，即為陽(yáng)性。
Hep 3B2.1-7（肝癌）  中性粒趨化蛋白2（NAP-2/CXCL7） 瘦素受體（LEPR）
MDA-MB-231（乳腺癌）  趨化因子（fractalkine/CX3CL1） 血管緊張素Ⅱ受體2（AT2R）
Hep G2（肝癌）  堿性成纖維生長(zhǎng)因子9（bFGF-9） 血管緊張素Ⅱ受體1（ANGⅡR-1）
HCT 116（結(jié)腸癌）  堿性成纖維生長(zhǎng)因子6（bFGF-6） 血管生成素4（ANG-4）
22RV1（前列腺癌）  堿性成纖維生長(zhǎng)因子4（bFGF-4） 可溶性肌球蛋白重鏈1（sMHC-1）
HT-29（結(jié)腸癌）  酸性成纖維生長(zhǎng)因子1（aFGF-1） 熱休克因子1（HSF-1）
KG-1（白血病）  凋亡相關(guān)因子配體（FASL） 血管活性肽酶抑制劑（VPI）
LoVo（結(jié)腸癌）  凋亡相關(guān)因子（FAS/CD95） 心肌肌凝蛋白輕鏈1（CMLC-1）
對(duì)于定量檢測(cè)來(lái)說(shuō)，主要還是一個(gè)準(zhǔn)確度的驗(yàn)證。不過(guò)我看到別人寫的內(nèi)容比我自己想說(shuō)的要好，所以就貼上去了。相對(duì)回收率可能會(huì)高于*的，如果只是說(shuō)“損失程度”，其實(shí)是不準(zhǔn)確的。應(yīng)該說(shuō)，回收率越接近*，說(shuō)明這個(gè)試劑盒的準(zhǔn)確度越高。

Elisa的發(fā)展小鼠乳鐵傳遞蛋白/乳鐵蛋白（LF/LTF）ELISA試劑盒