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培實(shí)驗(yàn)操作方法
3.1 藥敏片法
3.1.1 在“超凈臺(tái)”中,用經(jīng)(酒精燈)火焰滅菌的接種環(huán)挑取適量細(xì)菌培養(yǎng)物,以劃線方式將細(xì)菌涂布到平皿培養(yǎng)基上。具體方式;用滅菌接種環(huán)取適量細(xì)菌分別在平皿邊緣相對(duì)四點(diǎn)涂菌,以每點(diǎn)開始劃線涂菌至平皿的1/2。然后,找到第二點(diǎn)劃線至平皿的1/2,依次劃線,直至細(xì)菌均勻密布于平皿。(另:可挑取待試細(xì)菌于少量生理鹽水中制成細(xì)菌混懸液,用滅菌棉拭子將待檢細(xì)菌混懸液涂布于平皿培養(yǎng)基表面。要求涂布均勻致密,直接懸液法要把菌液濃度用生理鹽水或PBS調(diào)到0.5個(gè)麥?zhǔn)蠘?biāo)準(zhǔn)再涂布均勻。)
3.1.2 將鑷子于酒精燈火焰滅菌后略停,取藥敏片貼到平皿培養(yǎng)基表面。為了使藥敏片與培養(yǎng)基緊密相貼,可用鑷子輕按幾下藥敏片。為了使能準(zhǔn)確的觀察結(jié)果,要求藥敏片能有規(guī)律的分布于平皿培養(yǎng)基上;一般可在平皿*貼一片,外周可等距離貼若干片(外周一般可貼七片),每種藥敏片的名稱要記住。
3.1.3 將平皿培養(yǎng)基置于37℃溫箱中培養(yǎng)24小時(shí)后,觀察效果。
3.2 牛津杯法
3.2.1 在“超凈臺(tái)”中,用經(jīng)(酒精燈)火焰滅菌的接種環(huán)挑取適量細(xì)菌培養(yǎng)物,以劃線方式將細(xì)菌涂布到平皿培養(yǎng)基上。具體方式;用滅菌接種環(huán)取適量細(xì)菌分別在平皿邊緣相對(duì)四點(diǎn)涂菌,以每點(diǎn)開始劃線涂菌至平皿的1/2。然后,找到第二點(diǎn)劃線至平皿的1/2,依次劃線,直至細(xì)菌均勻密布于平皿。(另:可挑取待試細(xì)菌于少量生理鹽水中制成細(xì)菌混懸液,用滅菌棉拭子將待檢細(xì)菌混懸液涂布于平皿培養(yǎng)基表面。要求涂布均勻致密。)
3.2.2 以無菌操作將滅菌的不銹鋼小管(內(nèi)徑6nm、外徑8nm、高10nm的圓形小管,管的兩端要光滑,也可用玻璃管、瓷管),放置在培養(yǎng)基上,輕輕加壓,使其與培養(yǎng)基接觸無空隙,并在小管處標(biāo)記各種藥物名稱。每個(gè)平板可放4-6支小管。待分鐘后,分別向各小管中滴加一定數(shù)量的各種藥液,勿使其外溢。置37℃培養(yǎng)8-18小時(shí),觀察結(jié)果。
3.2.3 將平皿培養(yǎng)基置于37℃溫箱中培養(yǎng)24小時(shí)后,觀察效果。
3.3 打孔法:
該法較簡單,成本低,易操作,比較適用于商品藥物的檢測(cè)。
3.3.1 在“超凈臺(tái)”中,用經(jīng)(酒精燈)火焰滅菌的接種環(huán)挑取適量細(xì)菌培養(yǎng)物,以劃線方式將細(xì)菌涂布到平皿培養(yǎng)基上。具體方式;用滅菌接種環(huán)取適量細(xì)菌分別在平皿邊緣相對(duì)四點(diǎn)涂菌,以每點(diǎn)開始劃線涂菌至平皿的1/2。然后,找到第二點(diǎn)劃線至平皿的1/2,依次劃線,直至細(xì)菌均勻密布于平皿。(另:可挑取待試細(xì)菌于少量生理鹽水中制成細(xì)菌混懸液,用滅菌棉拭子將待檢細(xì)菌混懸液涂布于平皿培養(yǎng)基表面。要求涂布均勻致密。)
3.3.2 以無菌操作將滅菌的不銹鋼小管(外徑為4毫米、孔徑與孔距均為3毫米,管的兩端要光滑,也可用玻璃管、瓷管),放置在培養(yǎng)基上打孔,將孔中的培養(yǎng)基用針頭挑出,并以火焰封底,使培養(yǎng)基能充分的與平皿融合(以防藥液滲漏,影響結(jié)果)。
3.3.3 加樣:按不同藥液加樣,樣品加至滿而不溢為止。
3.3.4 將平皿培養(yǎng)基置于37℃溫箱中培養(yǎng)24小時(shí)后,觀察效果。
對(duì)外承攬?jiān)囼?yàn):免疫組化,熒光,Tunel,Elisa,WB,
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