包裝規格：48T/96T

檢測方法：酶聯免疫大鼠透明質酸（HA）ELISA 試劑盒

檢測標本：血清、血漿、尿液、組織勻漿等

本試劑盒僅供科研使用!

試劑盒組成

需要而未提供的試劑和器材

1.   酶標儀(450nm檢測波長濾光片，570nm或630nm校正波長濾光片) 。

2.   洗板機（可調注液量，保證每孔洗液加至0.35ml而不溢出）。

3.   超凈工作臺，生物安全柜，通風柜。大鼠透明質酸（HA）ELISA 試劑盒

4.   高精度單道加液器（量程為0.5-10μl, 2-20μl,20-200μl,200-1000μl).

5.   高精度多道加液器（8道或12道，量程為50-300μl).

6.   37℃恒溫箱。

7.   低溫離心機。

8.   電冰箱（4℃,-20℃,-86℃）.

9.漩渦混合儀，低頻振蕩器等

注意事項

1． 從2-8℃取出的試劑盒，在開啟試劑盒之前要室溫平衡至少30分鐘。酶標包被板開封后如未用完，板條應裝入密封袋中保存。

2． 嚴格按照說明書的操作進行，試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準。

3． 為避免交叉污染，要避免重復使用手中的吸頭和封板膜。

4． 不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質前使用。

5． 底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下。

6. 所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按生物廢棄物處理。終止液為2M硫酸，使用時必須注意安全。

7. 各步驟加樣均應使用加樣器，并經常校準其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內，如標本數量多，*使用排槍加樣。

8. 每次試驗測定的同時做標準曲線，。如標本中待測物質含量過高（樣本OD值大于標準品孔zui高濃度的OD值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數（n倍）后再測定，計算時請zui后乘以總稀釋倍數（×n）。

9. 配制試劑時，要用旋渦混合儀混勻。加入孔內的試劑，充分混勻對測試結果尤為重要，使用微量振蕩器(使用zui低頻率)，如無微量振蕩器，可在反應前手工輕輕晃動酶標板1分鐘，例如做圓周動作，使加入孔中的反應液混勻。

10. 實驗用酶標儀應嚴格按使用說明書規范操作，并在使用前充分預熱。

11. 手工洗板應注意：甩掉酶標板內的液體；在實驗臺上鋪墊幾層吸水紙，酶標板朝下用力拍幾次；將稀釋后的洗滌液至少0.35ml注入孔內，浸泡1-2分鐘。根據需要，重復此過程數次。自動洗板：如果有自動洗板機，應在熟練使用后再用到正式實驗過程中。

樣本要求

1．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。

2．標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存或根據存放，時間做相應溫度調整，但應避免反復凍融，（由于樣本種類過多，每個單位處理方式不一樣，本說明書不做詳細介紹）。

操作程序

1． 標準品的稀釋：（本試劑系統提供原倍標準品一支，用戶請按照說明自行在小試管中倍比稀釋）按下表格執行：

2． 根據待測樣品數量加上標準品的數量決定所需的板條數。每個標準品和空白孔建議做復孔。每個樣品根據自己的數量來定，能使用復孔的盡量做復孔。

3． 加樣:(詳細操作流程請客服索要說明書）

4． 配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用。20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋備用。

5． 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。

6． 顯色：每孔先加入顯色劑A 50μl，再加入顯色劑B 50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色10分鐘。

7． 終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。

8． 測定：以空白空調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應在加終止液后10分鐘以內進行。

結果判斷

1.每個標準品和標本的OD值應減去零孔的OD值。（若不減零孔值，標準曲線的零孔應相交于Y軸）

2.根據標準品的濃度及對應的OD值計算出標準曲線的直線回歸方程，再根據樣品的OD值在回歸方程上計算出對應的樣品濃度。也可以使用各種熟悉應用軟件來計算。

3．手工繪制標準曲線。以標準品濃度作橫坐標，OD值作縱坐標，以平滑線連接各標準品的坐標點。通過標本的OD值可在標準曲線上查出其濃度。*使用專業制作曲線軟件進行分析計算結果。

4．若標本OD值高于標準曲線上限，應適當稀釋后重測，計算濃度時應乘以稀釋倍數。