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上海哈靈生物科技有限公司
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ELISA試劑盒檢測不成功的原因
2021-3-30 閱讀(1475)
ELISA試劑盒即酶聯(lián)免疫吸附試驗，是一種常用的固相酶免疫測定方法。 由于ELISA方法靈敏
，特異性強(qiáng)不需要特殊設(shè)備，所以被廣泛應(yīng)用于各種抗原和抗體測定。但ELISA測定中影響因
素較多，而且其操作中有一定的技術(shù)要求，在臨床檢驗中除正常反應(yīng)外，有時常可見到一些錯
誤結(jié)果（即假陽性或假陰性）；本司在這里為大家解讀下ELISA試劑盒檢測的影響因素中標(biāo)本
的影響。
溶血標(biāo)本及混有紅細(xì)胞的血清采用ELISA法檢測易產(chǎn)生假陽性。可能是溶血血清中含有過
氧化酶物質(zhì)（紅細(xì)胞或血紅蛋白中的亞鐵血紅素），在洗滌過程中往往難以*洗脫，它可使
H2O2釋放出原生態(tài)氧（O），從而催化底物四甲基聯(lián)苯胺生成可溶性的有色物質(zhì)，即顯藍(lán)色，
產(chǎn)生假陽性［2］。所以嚴(yán)重溶血標(biāo)本禁用。
標(biāo)本受細(xì)菌污染。因菌體中可能含有內(nèi)源性辣根過氧化物酶，因此，被細(xì)菌污染的標(biāo)本同
溶血標(biāo)本一樣，亦可產(chǎn)生非特異性顯色而干擾測定結(jié)果。
標(biāo)本保存不當(dāng)。在冰箱中保存過久的標(biāo)本，在間接法ELISA測定中會導(dǎo)致本底過深、造成
假陽性；為克服上述干擾，ELISA試劑盒測定的血清標(biāo)本宜為新鮮采集；如不能立即測定，5 d
內(nèi)測定的血清標(biāo)本可存放于4℃，1周后測定的血清標(biāo)本應(yīng)低溫凍存；凍存后融解的標(biāo)本，蛋白
質(zhì)局部濃縮，分布不均，應(yīng)充分混合后再測定，但混勻時應(yīng)輕柔，不可強(qiáng)烈振蕩。
塑料試管能吸附抗原物質(zhì)，樣本久置在塑料管內(nèi)會使樣本內(nèi)抗原含量下降造成假陰性。zui
好使用真空采血管；并使用非抗凝標(biāo)本，肝素抗凝血漿會增加OD值，EDTA、酶抑制劑（如NaN3
）可抑制ELISA系統(tǒng)中辣根過氧化物酶活性。
標(biāo)本凝固不全。 在工作中，有時為了爭取時間快速檢測，常在血液還未開始凝固時即強(qiáng)
行離心分離血清，使血清中仍殘留部分纖維蛋白原，在ELISA測定過程中可以形成肉眼可見的
纖維蛋白塊，易造成假陽性結(jié)果；因此血液標(biāo)本采集后必須使其充分凝固后再分離血清。
