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BCA 蛋白定量試劑盒

產(chǎn)品簡介：

目前世界上的蛋白濃度檢測方法是：BCA 蛋白定量試劑盒(BCA Protein Assay

Kit)和 Bradford 蛋白定量試劑盒(Bradford Protein Assay Kit)。BCA 法與傳統(tǒng)方法相比更

簡單、更穩(wěn)定、更靈敏度。BCA 法測定蛋白濃度兼容性亦很好，不受大部分樣本中其他成

分的影響，對于 5%以內(nèi)的 SDS、Triton X-100、Tween 20、Tween 80 具有很好的兼容

性,但 BCA 法測定蛋白濃度易受螯合劑、高濃度的還原劑等的影響，在 BCA 法測定蛋白濃

度前應盡量使：EDTA 濃度≤m10M，DTT 濃度≤1mM，2-ME≤0.01%。

在 50～1000μg/ml 濃度范圍內(nèi)有較好的線性關(guān)系，

其小檢出量為 25μg/ml。本試劑盒僅用于科研領域，不宜用于臨床診斷或其他用途。

產(chǎn)品組成：

自備材料：

1、酶標儀或分光光度計

2、96 孔板或 EP 管

3、恒溫箱或水浴鍋

操作步驟(僅供參考)：

1、取 1ml 蛋白標準配制液*加入到含有 20mg 的蛋白標準(BSA)中，充分溶解后配制成

20mg/ml 的蛋白標準溶液，配制后可立即使用，配制的蛋白標準溶液應-20℃保存。

2、取適量的 20mg/ml 蛋白標準溶液，稀釋至終濃度為 500μg/ml 或所需濃度。如取 25μ

l 蛋白標準(20mg/ml)，加入 975μl 稀釋液，充分混勻即配制成 500μg/ml 蛋白標準溶

液。注意：待測蛋白溶解于什么樣的稀釋液中，蛋白標準也宜溶解于什么樣的稀釋液中，

一般可用 0.9%NaCl 或 PBS 作為溶解 BSA 稀釋液，稀釋后的 500μg/ml 蛋白標準溶液

也應-20℃保存。

3、根據(jù)樣品數(shù)量，按試劑(A):試劑(B)=50:1 的比例配制 BCA 工作液，即取 50 份 BCA 試

編號

名稱

250T

500T

2500T

Storage

試劑(A): BCA 試劑 A

50ml

100ml

500ml

RT 避光

試劑(B): BCA 試劑 B

1.5ml

3ml

15ml

RT

試劑(C): 蛋白標準(BSA)

20mg

20mg

20mg

RT

試劑(D): 蛋白標準配制液

5ml

10ml

10ml

RT

使用說明書

1 份

BCA Protein Assay Kit

HLPT0001

HLPT0001

HLPT0001

上海哈靈生物科技有限公司劑 A 和 1 份 BCA 試劑 B，充分混勻，即獲得 BCA 工作液(注意：正常 BCA 工作液應為

蘋果綠或墨綠色，如變?yōu)樽仙蚱渌伾珣獥売?。例如取 5ml BCA 試劑 A 和 0.1ml BCA

試劑 B，配制成 5.1ml BCA 工作液，BCA 工作液室溫 24 小時內(nèi)穩(wěn)定。

4、將 500μg/ml 蛋白標準溶液按 0、1、2、4、8、12、16、20μl 加到 96 孔板或 EP 管中，

加稀釋液補足至 20μl，其蛋白標準濃度依次為 0、25、50、100、200、300、400、

500μg/ml。

5、加 20μl 待測蛋白到 96 孔板或 EP 管中，如果樣本不足 20μl，用稀釋液補足至 20μl。

注意：如果標準品稀釋液與溶解待測蛋白的溶液不同，應在待測蛋白中加入 20μl 稀釋

液；如果標準品稀釋液與溶解待測蛋白的溶液相同，無需在待測蛋白孔中加入 20μl 稀

釋液，以減少不同溶液的差異。

6、向各孔或 EP 管加入 200μl 配制好的 BCA 工作液，37℃孵育 20～30min。

7、酶標儀或分光光度計測定 562nm 波長處吸光度(如無 562nm，540～595nm 之間的波

長也可)，各孔或 EP 管吸光度減去未加 500μg/ml 蛋白標準溶液的吸光度，以求得的差

值為縱坐標：以標準孔或 EP 管中蛋白濃度(μg/ml)為橫坐標，得出標準曲線及回歸方程，

根據(jù)標準曲線計算出待測樣品的蛋白濃度。

注意事項：

1、蛋白標準(BSA)粉末溶解于蛋白標準配制液后，即獲得蛋白標準原液(即 20mg/ml 的蛋

白標準)，該原液中含有防腐劑，不影響后續(xù)檢測，該蛋白標準原液-20℃保存。

2、待測蛋白溶解于什么樣的稀釋液中，蛋白標準也宜溶解于什么樣的稀釋液中，否者待測

蛋白與蛋白標準中所含非蛋白成分不一致，有可能導致測定不準確。

3、如果檢測效果不佳，可以室溫放置 2h 或 60℃放置 30min，顏色會隨著時間的延長不

斷加深，顯色反應也會隨溫度升高而加快；如果濃度較低，可以適當延長孵育時間或在

較高溫度下孵育。

4、測定標準曲線時發(fā)現(xiàn)隨著標準品濃度的增加吸光度或顏色沒有明顯變化，可能的原因是

樣品中含有嚴重干擾 BCA 法測定蛋白濃度的物質(zhì)。

5、BCA 法檢測時，待測樣本中不應含有 EGTA，否則影響檢測結(jié)果。

6、因 BCA 法測定時顏色會隨著時間的延長不斷加深，建議每次測定時都作標準曲線，且

顯色反應的速度和溫度有關(guān)，所以除非精確控制顯色反應的時間和溫度，否則每次都做

標準曲線。

7、如果沒酶標儀，也可用普通分光光度計測定，但應考慮根據(jù)比色皿的小測定體積，應

按比例適當加大 BCA 工作液的用量使總體積不小于小檢測體積，樣品和標準品的用

量亦相應按比例放大；使用分光光度計測定蛋白濃度時，可以測定的樣品數(shù)量可能會顯

著減少，建議把系列標準品用量增加至 100μl，BCA 工作液用量增加至 1ml。

8、為了加快 BCA 法測定蛋白濃度的速度可以適當加熱，但是切勿過熱，否則易失效。

有效期： 12 個月有效。蛋白標準配制成溶液后應-20℃凍存。附錄 1：標準曲線制作：在室溫條件下按說明書操作，對系列標準進行吸光度的

測定，其數(shù)值及標準曲線如下(僅供參考)，我們建議采用 50、100、200、300、400、500

μg/ml 的蛋白標準繪制標準曲線(標準品濃度過高或過低都有可能影響標準曲線的準確性)：

蛋白標準(μg/ml)

25

50

100

200

300

400

500

吸光度

0.010 0.035 0.094 0.141 0.237 0.319 0.405

注意：對于 10-50μg/ml 范圍內(nèi)的蛋白樣品，要充分考慮如 EDTA、2-ME、DTT 等干

擾因素，其檢測結(jié)果波動較大，標準品亦有波動，請注意小心精細操作

附錄 2：

與國內(nèi)產(chǎn)品進行對比實驗，在室溫相同條件下按說明書操作，

對系列標準進行吸光度的測定，采用 50、100、200、300、400、500μg/ml 的蛋白標準

繪制標準曲線，結(jié)果顯示 試劑盒斜率優(yōu)于某 BCA 試劑盒

及標準曲線如下(僅供參考)：

BCA