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上海哈靈生物科技有限公司
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細(xì)胞色素P450酶體系濃度定量檢測試劑盒產(chǎn)品說明書
2020-1-15 閱讀(503)
細(xì)胞色素P450酶體系濃度定量檢測試劑盒產(chǎn)品說明書
主要用途
細(xì)胞色素P450酶體系濃度定量檢測試劑是一種旨在通過一氧化碳處理產(chǎn)生的結(jié)合色素還原后，產(chǎn)生差異比色峰值的變化，來測定樣品中酶系濃度的而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過精心研制、成功實驗證明的。其適用于各種細(xì)胞或組織裂解萃取液樣品（動物、人體、植物等）、純化微粒體樣品以及體液樣品（血清和血漿等）細(xì)胞色素P450酶系的總濃度檢測。產(chǎn)品嚴(yán)格無菌，即到即用，操作簡捷，性能穩(wěn)定。
技術(shù)背景
細(xì)胞色素P450酶是肝細(xì)胞微粒體復(fù)合功能單加氧化酶系統(tǒng)的總稱，共有15000多種亞酶，其中動物和人體4778種、植物5769種、真菌3045種、細(xì)菌1200種等。作用在于體內(nèi)外源化合物（xenobiotics），包括藥物、致癌劑、化學(xué)污染物的氧化代謝，即單加氧化作用（monooxygenation）和羥化作用（hydroxylation）。細(xì)胞色素P450酶是微粒體中一氧化碳結(jié)合色素，在450nm波長產(chǎn)生峰值。
產(chǎn)品內(nèi)容
緩沖液（Reagent A） 50毫升
還原液（Reagent B） 5管
稀釋液（Reagent C） 5毫升
產(chǎn)品說明書 1份
保存方式
保存在4℃冰箱里，有效保證6月
用戶自備
1.5毫升離心管：用于樣品操作的容器
一氧化碳：用于結(jié)合樣品色素
比色皿：用于比色的容器
分光光度儀：用于比色分析
實驗步驟
實驗開始前，移出1毫升稀釋液（Reagent C）到還原液（Reagent B）管里，混勻后，標(biāo)記為反應(yīng)工作液，置于冰槽里備用。
1．準(zhǔn)備好待測樣品（例如細(xì)胞或組織裂解萃取液或微粒體樣品等），置于冰槽里
2．設(shè)定好分光光度儀（溫度為25℃）：波長450nm和490nm，并置零
3．移取2毫克待測樣品到1.5毫升離心管
4．加入適量的緩沖液（Reagent A）到總?cè)萘繛?00微升，混勻
5．插入一氧化碳管于液體中，氣泡20秒（注意：使用微量一氧化碳，避免管內(nèi)液體溢出）
6．加入100微升還原工作液，混勻
7．移入到1毫升比色皿
8．即刻放進(jìn)分光光度儀檢測，獲得吸光讀數(shù)
9．實際吸光讀數(shù)：OD450－OD490
10．計算樣品濃度：
[實際吸光讀數(shù)X樣品稀釋倍數(shù)X 1.0（體系容量；毫升]÷[0.9（樣品容量；毫升）X 91（毫摩爾吸光系數(shù)）]＝微摩爾/毫升÷（樣品重量）毫克/毫升＝微摩爾/毫克
