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冰凍切片組織線粒體膜通道孔(MPTP)熒光檢測試劑盒產品說明書

2019-5-20  閱讀(575)

主要用途

 

冰凍切片組織線粒體膜通道孔(MPTP)熒光檢測試劑是一種旨在通過鈣黃綠素-鈷技術,選擇性地聚集在線粒體內呈現熒光染色,而存在于或由線粒體釋放到細胞漿的熒光染料,即刻發生熒光淬滅,來分析和觀察線粒體膜通道孔活性的而經典的技術方法。該技術經過精心研制、成功實驗證明的。其適用于各種冰凍組織線粒體(動物、人體、昆蟲等)膜通道孔活性的檢測。產品嚴格無菌,即到即用,分辨率高,操作簡捷,性能穩定。

 

技術背景

 

線粒體膜通道孔(mitochondrial permeability transition pore;MPTP)是由線粒體內外膜成分構成的非特異性且鈣離子依賴性通道。在細胞凋亡或壞死時,線粒體內容物通過膜通道孔釋放到胞漿中。膜通道孔的開放,顯著改變線粒體的通透性。鈣離子過度進入、線粒體谷胱苷肽的氧化和活性氧族水平的增加等導致膜通道孔的持續開放,而造成細胞色素C的釋放和線粒體膜電位的消失。鈣黃綠素-AM,又稱雙甲亞胺二乙酸鈉熒光素-乙酰氧基甲基酯【bis(bis-carboxymethyl amino methyl fluorescein)-acetoxymethyl ester】,作為熒光探針:,適宜的分子量622d,小于1.5kd;第二,幾乎不具有膜結合性;第三,不是線粒體酶的底物;第四,容易進入細胞及其線粒體。鈣黃綠素-AM進入細胞后,被細胞內酯酶切離,產生具有極性的熒光性強的鈣黃綠素。鈣黃綠素進入線粒體后,被線粒體俘獲。同時胞漿內的鈣黃綠素受到其淬滅劑鈷離子的淬滅。一旦線粒體膜通道孔瞬時開放,鈣黃綠素釋放出來,被鈷離子淬滅。線粒體內鈣黃綠素熒光的變化,表明膜通道孔的開放狀態。



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