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上海哈靈生物科技有限公司
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公司信息
細菌總ATP酶活性酶連續反應光譜法定量檢測試劑盒產品說明書
2017-11-27 閱讀(1040)
主要用途
細菌總ATP酶活性酶連續反應光譜法定量檢測試劑是一種旨在使用ATP酶、丙酮酸激酶和乳酸脫氫酶連續循環法反應系統，測定ATP水解產生的ADP過程中，伴隨的還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸（NADH）的氧化反應， 即采用光譜法測定其氧化后峰值（NADH濃度）的變化，以此進行測算單位酶活性的而經典的技術方法。該技術由大師級科學家精心研制、成功實驗證明的。其適合于各種細菌細胞ATP酶的總活性檢測。產品不含污染性蛋白酶，嚴格無菌，即到即用，操作簡捷，性能穩定，反應優化，檢測敏感。
技術背景
腺苷三磷酸酶，又稱為ATP酶（adenosine triphosphatase；ATPase或ATP phosphohydrolase；EC3.6.1.3），屬于磷酸水解酶，可以催化含磷的酸酐分解，即催化三磷酸腺苷分解為二磷酸腺苷和無機磷。ATP酶的去磷酸化反應釋放出能量，成為細胞生命代謝的能源。ATP酶為跨膜蛋白（transmembrane），幫助傳輸各種代謝分子進出細胞。根據ATP酶的結構和功能，分為五類不同的ATP酶，即F、V、A、P和E型。F型，又稱為F1F0型，主要在線粒體、葉綠體或細菌細胞膜上，進行氧化磷酸化或光合作用；P型，又稱為E1E2 型，存在于細菌和真核細胞膜和細胞器上，其功能在于水解ATP獲得能量，跨膜運輸各種化學分子，包括Ca2+傳輸性、Na+-K+ /H+-K+傳輸性、H+傳輸性和所有細菌型等。V型，又稱為V1V0型，主要存在于真核細胞的液泡（vacuole）中。A型，又稱為A1A0型，存在于古生菌（archaea）中。E型，為細胞表面的酶。基于底物ATP， 受到各種組織細胞中的 ATP酶的水解，進而通過丙酮酸激酶（pyruvate kinase；PK）和乳酸脫氫酶（lactate dehydrogenase；LDH）反應系統中，由還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸（reduced nicotinamide adenine dinucleotide；NADH）轉化為氧化型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸（nicotinamide adenine dinucleotide；NAD），所產生的峰值變化（340nm），來定量分析ATP酶的總活性。
用戶自備
15毫升錐形離心管：用于樣品操作的容器
1.5毫升離心管：用于樣品操作和保存的容器
（微型）臺式離心機：用于樣品操作
恒溫搖床：用于細菌培養
培養箱：用于反應孵育
比色皿：用于光譜分析的容器
分光光度儀：用于光譜分析
注意事項
1．本產品為20次操作，包括背景對照
2．操作時，須戴手套
3．系統操作過程中，背景測定只需1次
4．建議樣品忌用磷酸緩沖溶液
5．如果測定初期，背景對照吸光讀數不穩定，表明體系均衡溫度不理想，建議樣品加入前孵育由3分鐘延長至5分鐘
6．加入樣品啟動反映后3秒內即刻光度測定
7．反應測定值由高到低變化；測定可以持續20分鐘
8．測定值由高到低變化，即0分鐘測定讀數高于10分鐘或20分鐘測定讀數，表明有酶活性
9．光譜測定后，比色皿須清洗*
10．建議待測樣本蛋白濃度為100微克/50微升；如果樣本酶活性過低或過高，則可以增加或降低樣本量；注意計算公式的調整（本公司提供Bradford蛋白質濃度定量試劑盒30030.1）
11．ATP酶活性單位濃度定義：在37℃溫度下，pH 7.5條件下，每分鐘內能夠氧化1微摩爾還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸（NADH）所需的酶量作為一個活性單位
12．本公司提供系列ATP酶類技術產品
質量標準
1．本產品經鑒定性能穩定
2．本產品經鑒定檢測準確
