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上海哈靈生物科技有限公司
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ELISA試劑盒樣本中糖原的測定
2016-1-13 閱讀(593)
實驗原理
正常肝糖原的含量約占肝重的5%。許多因素可影響肝糖原的含量，入飲食、饑餓、糖皮質(zhì)激素及腎上腺素等。
糖原在濃酸中可水解為葡萄糖，濃硫酸能使后者進一步脫水生成糖醛衍生物—5-羥甲基呋喃甲醛。此化合物再和蒽酮作用生成藍色化合物，與用同法處理的標準葡萄糖溶液比色，即可推算出糖原含量。糖原在濃堿溶液中非常穩(wěn)定，故在顯色之前肝組織先放在濃堿中加熱，破壞其他成分，而保留肝糖原。
實驗方法
1.肝糖原的提取：取體重在25g以上的健康小白鼠1只，斷頭處死，剖腹取出肝臟，用生理鹽水沖洗后，再用濾紙吸干水分，準確稱取肝組織0.5g，放入盛有30% KOH溶液1.5ml的試管中，置沸水浴煮20分鐘（肝組織必須全部溶解，否則影響比色），取出后冷卻，將試管內(nèi)容物全部移入100ml的容量瓶（用蒸餾水多次洗滌試管，一并收入容量瓶內(nèi)），加蒸餾水至刻度，仔細混勻。
2.糖原的測定：取干凈試管3支，編號后按表1-6加樣，混勻后，置于廢水浴中10分鐘，冷卻后選用620nm的單光色，用空白管調(diào)零，測定2.3管的吸光度。
表1-6
3.計算：
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注意事項
1.此法測定值在肝糖原含量為1.5-9%之間。若肝糖原小于1%時，由于蛋白質(zhì)的干擾測定結(jié)果不準確，須改用間接法測定，即在肝組織消化后用95%乙醇沉淀肝糖原（1:1.25），離心分離，用蒸餾水2ml溶解肝糖原，再按1-6表操作。
2.公式中的1.11為此法測得葡萄糖含量換算成糖原含量的常數(shù)，即100μg葡萄糖用蒽酮試劑顯色相當于111μg糖原用蒽酮試劑所顯之色。
