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通用型DNA損傷彗星檢測試劑盒?主要用途

通用型DNA損傷彗星檢測試劑是一種旨在采用組織細胞堿性凝膠電泳，在電場環境下，損傷變性的DNA片段遷移形成特定的形態，即DNA移動尾巴，來進行體外評價和半定量分析DNA損傷程度的而經典的技術方法。該技術經過精心研制、成功實驗證明的。其適用于新鮮動物細胞、組織、血液、骨髓等樣品的DNA損傷研究，包括DNA鏈斷裂、氧化性堿基損傷、DNA剪切損傷、DNA交聯、DNA修復等，應用于環境和藥物毒理學、放射學、氧化應急反應等研究。產品嚴格無菌，即到即用，性能穩定，操作簡便，重復一致。

技術背景

彗星檢測技術（Comet assay），又稱為單細胞凝膠電泳檢測技術（single cell gel electrophoresis assay；SCGE）或微凝膠電泳檢測技術（microgel electrophoresis assay），是基于變性切離的DNA片段，在電場的影響下，從細胞中移出的原理，而完整的超螺旋DNA仍然保持在細胞核內。通過凝膠電泳，呈現出分子遷移圖形，形成彗星拖尾（comet tail）現象，即完整DNA的細胞染色體為“頭"，而松散和斷裂的DNA為“尾"，以此評價DNA損傷程度。這是分析單一細胞DNA鏈斷裂的敏感方法之一。其技術方法的基本步驟是：*，細胞固定包埋在凝膠里；第二，細胞裂解處理；第三，DNA變性處理；第四，電泳遷移；第五，染色和圖像分析。由此觀察DNA遷移形態，進行體外檢測，成為細胞DNA損傷研究的基本手段。其中電泳條件將決定檢測的敏感程度。堿性電泳（alkaline electrophoresis）為常規電泳檢測，可以檢測單鏈DNA斷裂、雙鏈DNA斷裂、大部分無嘌呤核酸位點（apurinic site）和無嘧啶核酸位點（apyrimidic site）、堿不穩定DNA結合物（alkali-labile DNA adduct）等DNA損傷。

產品內容

膠體液（Reagent A） 毫升

基質液（Reagent B） 毫升

清理液（Reagent C） 毫升

裂解液（Reagent D）     毫升

電泳液（Reagent E）     500毫升（用戶自備）

中和液（Reagent F）     200毫升（用戶自備）

染色液（Reagent G） 毫升

產品說明書 1份

保存方式

保存染色液（Reagent G）在－20℃冰箱里，避免光照；其余的保存在4℃冰箱里；有效保證6月 

用戶自備

無離子水：用于稀釋電泳緩沖液

磨砂載玻片和蓋玻片：用于放置樣品進行微凝膠電泳的器材

電泳槽：用于微凝膠電泳的裝置

恒溫培養箱或恒溫水槽：用于孵育反應

1.5毫升離心管：用于樣品操作的容器

90 mm培養皿：用于樣品處理、染色等的容器

熒光顯微鏡：用于觀察細胞彗星現象

實驗步驟

一、 瓊脂載玻片準備

1． 準備1張磨砂載玻片，磨砂面朝上

2． 將膠體液（Reagent A）置于微波爐里加熱溶化（注意：避免溢出）

3． 放進40℃恒溫水槽孵育10分鐘

4． 移出xx微升膠體液（Reagent A）到載玻片中間

5． 蓋上潔凈的蓋玻片

6． 輕壓蓋玻片5分鐘

7． 放進4℃冰箱里備用

二、 樣品準備

實驗開始前，將基質液（Reagent B）置于微波爐里加熱溶化，然后放進40℃恒溫水槽備用。然后進行下列操作。

1． 準備好新鮮培養細胞、組織樣本、血液樣品等 （1 X 105細胞）

2． 移入到1.5毫升離心管 

3． 放進4℃微型臺式離心機離心10分鐘，速度為300g

4． 加入xx毫升清理液（Reagent C），混勻

5． 移取20微升到新的1.5毫升離心管

6． 加入xx微升在40℃恒溫水槽里的基質液（Reagent B）

7． 用槍頭上下抽吸混勻

8． 用大拇指推動移走上述制備的載玻片上的蓋玻片

9． 即刻移取75微升細胞基質混合液到載玻片上

10． 用新的蓋玻片蓋上

11． 輕壓蓋玻片5分鐘

12． 放進4℃冰箱里冷卻10分鐘，直至膠體凝結，避免光照

13． 用大拇指推動移走蓋玻片

14． 將載玻片放進9cm培養皿

15． 加入xx毫升預冷的裂解液（Reagent D）

16． 放進4℃冰箱里孵育60分鐘

17． 倒去裂解液

三、 凝膠電泳

1． 移出xx毫升電泳液（Reagent E）到250毫升三角燒瓶里 

2． 加入225毫升無離子水，充分混勻后，標記為電泳工作液

3． 加入xx毫升電泳工作液到上述9cm培養皿

4． 室溫下孵育30分鐘

5． 倒去電泳工作液

6． 將載玻片置于（具有溫度控制的）水平電泳槽里

7． 加入適量的電泳工作液到電泳槽里，恰好在載玻片之上

8． 插上電源，設定電壓25伏或電流300毫安

9． 在4℃環境下，電泳30分鐘

10． 斷開電源，取出載玻片

11． 放進無離子水里浸潤2次，每次1秒

12． 放進9cm培養皿

13． 加入xx毫升中和液（Reagent F）

14． 在4℃冰箱里孵育5分鐘

15． 倒去中和液

16． 空氣中晾干